实验方案与预期结果.doc

实验目的:发现更多由于PCR技术局限而检测不到的潜在基因突变点,并通过比较不同听神经瘤之间的生物学行为,研究基因突变与肿瘤生物学性状之间的关系。实验方案:RNA提取:从25例病人的新鲜听神经瘤组织中提取RNA;cDNA转换:提取出来的RNA逆转录成cDNA,并通过PCR技术扩增杂交与RNA芯片检测:RNA芯片含mRNA全序列,通过核酸分子杂交原理进行核酸序列分析的,芯片上已知序列的核酸探针通过碱基互补配对来检测分析未知序列,并通过计算机处理杂交信号来确定基因突变点。具体实验流程详见公司材料说明书。第3步可能的原理:铺瓦式阵列(TiledArray)是一种常用的用于检测突变位点的阵列,其设计原理可以下列说明:为了检测待测cDNA序列5’-ATCG中X位点,可以使用下面四个RNA探针:3’-AGTCGTAACGGTAGC3’-AGTCGTAGCGGTAGC3’-GGTAGC3’-AGTCGTATCGGTAGC用这四个探针与待分析序列同时杂交,严格控制杂交条件,那么完全互补探针的杂交信号最强,从而可以确定X位点。(参考文献:DNA芯片技术及其在突变检测中的应用)检测结果分析:通过RNA芯片技术得到的基因突变点,结合之前PCR后基因测序实验获得的NF2基因突变,确定其他基因的突变情况。比较:根据25例听神经瘤组织的生长速度、囊性变否、肿瘤大小进行及基因突变的情况分类比较研究基因突变与肿瘤生物学性状之间的关系。预期结果经RNA芯片检测出现大批的基因突变点,听神经瘤的突变基因不局限于PCR检测的NF2基因,如P16、TNF、A(1-3)、DCC等基因均可发现较多突变点。(参考文献:反向点杂方法检测听神经瘤基因突变)。不同的基因突变点与不同的肿瘤生物学性状之间的关系,还需进一步研究。