实验方案与预期结果.docx

通过 RNA 芯片检测 25 例听神经瘤的基因突变
实验目的：
发现更多由于 PCR 技术局限而检测不到的潜在基因突变点，并通过比较不
同听神经瘤之间的生物学行为，研究基因突变与肿瘤生物学性状之间的关系。
通过 RNA 芯片检测 25 例听神经瘤的基因突变
实验目的：
发现更多由于 PCR 技术局限而检测不到的潜在基因突变点，并通过比较不
同听神经瘤之间的生物学行为，研究基因突变与肿瘤生物学性状之间的关系。
实验方案：
1）RNA 提取：从 25 例病人的新鲜听神经瘤组织中提取 RNA ；
2）cDNA 转换：提取出来的 RNA 逆转录成 cDNA, 并通过 PCR 技术扩增
3）杂交与 RNA 芯片检测： RNA 芯片含 mRNA 全序列，通过核酸分子杂交原理
进行核酸序列分析的 ,芯片上已知序列的核酸探针通过碱基互补配对来检测分析未知序列，并通过计算机处理杂交信号来确定基因突变点。具体实验流程详见公司材料说明书。
第 3 步可能的原理：铺瓦式阵列 ( Tiled Array) 是一种常用的用于检测突变位点的 阵列 , 其 设 计 原 理 可 以 下 列 说明 : 为 了检 测 待 测 cDNA 序 列 5 ’ - TCAGCATXGCCATCG 中 X 位点 ,可以使用下面四个 RNA 探针 :
3’-AGTCGTAACGGTAGC
3’-AGTCGTAGCGGTAGC
3’-AGTCGTACCGGTAGC
3’-AGTCGTATCGGTAGC
用这四个探针与待分析序列同时杂交 ,严格控制杂交条件 ,那么完全互补探针的
杂交信号最强 ,从而可以确定 X 位点。
（参考文献： DNA 芯片技术及其在突变检测中的应用）
4）检测结果分析：通过 RNA 芯片技术得到的基因突变点，结合之前 PCR 后基
因测序实验获得的 NF2 基因突变，确定其他基因的突变情况。
5）比较：根据 25 例听神经瘤组织的生长速度、 囊性变否、 肿瘤大小进行及基因
突变的情况分类比较研究基因突变与肿瘤生物学性状之间的关系。
预期结果
经 RNA芯片检测出现大批的基因突变点 , 听神经瘤的突变基因不局限于 PCR检测的 NF2 基因，如 P16、TNF、A（1-3 ）、DCC 等基因均可发现较多突变点。 （参考文献：反向点杂方法检测听神经瘤基因突变 ）。不同的基因突变点与不同的肿瘤生物学性状之间的关系，还需进一步研究。