SOD测定方法.doc

聿酶液提取:称取鲜叶样品。,,加缓冲液使终体积为5ml。将提取液于10000转/分冷冻离心20分钟,上清液用于测定SOD,POD,CAT活力测定及丙二醛含量测定。羇SOD:薅测定SOD活性的试剂配制及用量:蒁①磷酸缓冲液(),;膈②EDTA-Na21mg/;莇③L一甲硫氨酸20mg/;莆④,;薃⑤NBTlmg/;薀⑥,空白不加酶液。螆反应总体积为4m1,肆第1组、4000Lx光照30min,遮黑布终止反应(用光照培养箱,灯管全部打开即可)。莀第2组、黑暗处理30min。虿置560nm处测定光密度。SOD活性单位以抑制NBT光化还原50%作为一个酶活性单位(u),按以下公式计算SOD活性:膅薂式中,Ack为照光管的吸光度值;AE为遮光管的吸光度值:V为样品液总体积((ml);Vt为测定时样品用量(ml);W为样品鲜重。莁螇蚅芃POD:%愈创木酚()、莈50ul酶液、%H202,芀摇匀,立即计时,1分钟后在470nm波长下比色,每1分钟记录一次吸光度值,连续记录5分钟。(U),按下式计算过氧化物酶活性:芈螇式中:dA470为反应时间内吸光度的变化:Vt为提取液总体积(ml);W为样品鲜重(g);Vs为测定时取用酶液体积(ml);t为反应时间(min)。螃节蚀膇薄莃螈CAT薆取酶提取液50u1,,%H2O2200u1,膁迅速摇匀,立即计时,1分钟后在UV-754分光光度计的240nm波长下比色,每1分钟记录一次吸光度值,连续记录5分钟。(U),按下式计算过氧化氢酶活性:肆肅节式中:△A240为反应时间内吸光度的变化;Vt为提取液总体积(ml):w为样品鲜重(g);Vs为测定时取用酶液体积(ml);t为反应时间(min),%的硫代巴比妥酸(TBA)(用10%三氯乙酸配制)。肀混合物于100℃沸水浴中加热20min