酶液提取:称取鲜叶样品。, ,加缓冲液使终体积为5ml。将提取液于10000转/分冷冻离心20分钟,上清液用于测定SOD, POD, CAT活力测定及丙二醛含量测定。
SOD:
测定SOD活性的试剂配制及用量:
①磷酸缓冲液() ,;
②EDTA-Na2 1mg/m1 ;
③L一甲硫氨酸20mg/mL ;
④ mg/ml,;
⑤NBT lmg/ml ;
⑥,空白不加酶液。
反应总体积为4m1,
第1组、4000Lx光照30min,遮黑布终止反应(用光照培养箱,灯管全部打开即可)。
第2组、黑暗处理30 min。
置560nm处测定光密度。SOD活性单位以抑制NBT光化还原50%作为一个酶活性单位(u),按以下公式计算SOD活性:
式中,Ack为照光管的吸光度值;AE为遮光管的吸光度值:V为样品液总体积((ml);Vt为测定时样品用量(ml); W为样品鲜重。
POD:
在试管中依次加入
4m1 %愈创木酚( pH6磷酸缓冲液配置)、
50ul酶液、
50 %H202,
摇匀,立即计时,1分钟后在470nm波长下比色,每1分钟记录一次吸光度值,连续记录5分钟。(U),按下式计算过氧化物酶活性:
式中:d A470为反应时间内吸光度的变化:Vt为提取液总体积(ml); W为样品鲜重(g); Vs为测定时取用酶液体积(ml); t为反应时间(min) 。
CAT
取酶提取液50 u 1,
加入3m1 mol/1 ,
%H2O2 200 u1,
迅速摇匀,立即计时,1分钟后在UV-754分光光
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