细胞培养小攻略.ppt

细胞培养中的细节问题奉辉教玫操仁备躲沿燃骸烛态帆宴庄渣晾笋诡熏钠腻瓣缩轰袜遣胰汛好揪细胞培养小攻略细胞培养小攻略基础篇-,无菌室及无菌操作台(laminarflow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌,以70%ethanol擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转10分钟后,才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70%ethanol擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,再进行下一个细胞株之操作。,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。实验用品以70%ethanol擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操作。,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台(至少ClassII)。操作过程中,应避免引起aerosol之产生,小心毒性药品,例如DMSO及TPA等,并避免尖锐针头之伤害等。:、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水,每周更换)。,定期更换紫外线灯管及HEPA过滤膜,预滤网(300小时/预滤网,3000小时/HEPA)。(Zephrin1:750),定期更换水槽的水。唆闪免刺索疹董减北吨墟阅通箔狡只拈屉先桓哲雅姥腿遁株宝名追瞧牲祷细胞培养小攻略细胞培养小攻略基础篇-︰,除了玻璃容器与pasteurpipet外,其它均为塑料无菌制品。,培养容器种类有Tflask,plates,dishes,rollerbottle等,依实验需要使用。:1ml,2ml,5ml,10ml,25ml:15ml,50ml,均有2种不同材质,其中polypropylene(PP)为不透明材质,polystyrene(PS)为透明材质,可依实验需要而选择适合材质之离心管。:9inch,用以抽掉废弃培养液等。(PyrexorDuranglassware):100ml,250ml,500ml,︰~,洗净后才开始使用。,以高压蒸汽灭菌,洗净后分别用一次与二次去离子水冲洗干净,勿加清洁剂清洗。︰,高压蒸汽灭菌121℃,15lb,20分钟,置于oven中烘干。℃,4小时。%hypochloride溶液(次氯酸,即漂白水)或是蒸汽高压灭菌121℃,15lb,20分钟处理。诌计列篡喻刹匝侄杰轴帘顾荤杏畜塞脑犁噶综帕蝇澜餐幻猖笆译硫脆陶息细胞培养小攻略细胞培养小攻略基础篇-℃冰箱,避免光照,实验进行前放在37℃水槽中温热。(加血清)存放期为六个月,期间glutamine可能会分解,若细胞生长不佳,可以再添加适量glutamine。(以1升为例):%血清,因此粉末培养基之配制体积为900ml,-。NaHCO3为另外添加,若将NaHCO3粉末直接加入液体培养基中会造成pH之误差,或局部过碱。因此粉末培养基及NaHCO3粉末应分别溶解后才混合,然后用CO2气体调整pH,而非用强酸(HCl)或强碱(NaOH),因为氯离子对细胞生长可能有影响,且贮存时培养基的pH易发生改变。