《叶绿素，sod》.doc

1叶绿素含量测定:80%的丙酮液的配制:4L丙酮+1L蒸馏水。(做三个重复),加入25ml浓度为80%的丙酮液,放在黑暗处浸提大约36小时后取出,稀释4倍后分别在波长663nm、645nm、652nm和470nm下测定光密度,以80%的丙酮液为空白。(参考陈建勋,王晓峰主编的《植物生理学实验指导》,P35~36)也可用95%乙醇溶液,在665、649、470nm处有最大吸收峰Ca=-=-=(1000D470--114Cb)/2452抗氧化酶活性的定:()(PBS)(pH=)溶液的配制:·12H2O+·2H2O,定容到4L。(参考陈建勋,王晓峰主编的《植物生理学实验指导》,P134)。取低温保存的鲜样,称2g左右的叶片(或根)放在50ml的离心管,(pH=)(最好是较冷的磷酸缓冲溶液,防止研磨时温度过高使酶失活),研磨(用磨碎机磨),8000r/min的冷冻离心机下离心20分钟,上清液为粗酶液。(MDA)的测定:20%三氯乙酸(TCA)溶液的配制:称200g三氯乙酸,用蒸馏水定容到1000ml。(参考陈建勋,王晓峰主编的《植物生理学实验指导》,P124);%硫代巴比妥酸(TBA)溶液的配制:称5g硫代巴比妥酸(TBA),用20%三氯乙酸(TCA)溶液溶解并定容到1000ml。(参考陈建勋,王晓峰主编的《植物生理学实验指导》,P124)(先加少量的氢氧化钠1mol/L溶解);(=)(做三个重复)+3mlTBA――振荡――沸水浴上反应30min――冷却(至少30min)――比色(OD600、OD532、OD450)。(参考陈建勋,王晓峰主编的《植物生理学实验指导》,P124)(SOD)的测定:NBT(400ml)混合反应液:392mlPBS(Ph=),+++8ml核黄素溶液+-Na溶液()。(另配)100mlPBS溶液加EDTA--Na测试时:取3ml反应液+(根)(叶)粗酶液,于光照培养箱中6-10分钟,OD650下测定吸光度。(POD)的测定:(PBS)(pH=)溶液的配制:·12H2O+·2H2O,定容到1000ml。%H2O2溶液的配制:%H2O2,=(PBS)定容到250ml。%愈创木酚溶液的配制:,=(PBS)定容到250ml。%H2O2溶液+%愈创木酚溶液+=(PBS