口腔黏膜上皮细胞癌变机制实验研究-口腔临床医学(口腔颌面外科)专业毕业论文.docx

!;望至望查堂堕堂堕!!塑堑竖!:堂竺丝兰【结果】B(a)P或联合TPA诱导培养HIOEC细胞得到HIOEC—B(a)P(HB)和HIOEC—B(a)(HBT)细胞系。HIOEC细胞为分散生长多角形上皮样细胞,细胞形态较一致,核浆比例适中;I-IB细胞表现为接触抑制消失,局部细胞重叠生长,HE染色可见细胞核浆比例增加,有多个核仁,核分裂较多,可见散在瘤巨细胞;HBT细胞在传代培养的第65代起出现部分细胞成纤维样改变,细胞体积变小,分散生长,软琼脂培养后挑选克隆培养,则细胞均为成纤维样细胞;HE染色见细胞分散生长,核浆比例增加,有多个核仁。透射电镜下HIOEC细胞胞浆内张力丝丰富、粗壮,致密排列;HB细胞核大而不规则,常染色质多,多个核仁,张力丝稀疏、细小;HBT细胞核大,核膜凹凸不规则,常染色质多,多个核仁,胞浆内张力丝罕见,细胞器丰富,线粒体、内织网富集。扫描电镜下HIOEC细胞大小较均一,为多边型细胞;HB细胞多边形,大小不一,胞浆突起多,细胞表面微绒毛较多;HBT细胞长梭形,细胞表面微绒毛丰富。HIOEC细胞生长相对缓慢,HB、HBT细胞生长较快,并且生长速度随着体外传代代数增加而加快;细胞后诱导S期含量明显增加,%,%,;%;HB细胞具有软琼脂集落形成能力,但明显比HBT细胞差;第55代HB细胞裸小鼠皮下形成包膜完整的肿块,由大量角化物和角化细胞组成,部分细胞角化不全,包膜下有2—3层上皮细胞,局部细胞增生成团,细胞表现一定的异型性;第69代细胞形成肿块表现为鳞状细胞癌,肿瘤界限清楚,局部细胞增生成乳头状,细胞分化较好,异型性明显,病理核分裂像多见,成瘤率为ri哥燹迥人掌|盘学阮2003级楫十学位论又50%。第74代细胞形成典型鳞状细胞癌,细胞分化较好,成瘤率为65%。第96代细胞形成肿瘤,,成瘤率为80%。HBT细胞目前尚未观察到裸鼠皮下成瘤性。HIOEC细胞无穿膜生长细胞;不同阶段HB细胞和HBT细胞均能穿膜生长:P23、P60、P100船细胞以及P69船T-E细胞均为上皮样细胞,P110耶T-SA、P69HBT-F细胞均为成纤维样细胞;平均每个视野(400×)下穿膜细胞数分别为:、、、、、。HB、I-IBT细胞均表达细胞角蛋白,HB细胞Vim弱阳性,船T细胞Vim表达增强。HIOEC、不同阶段HB和HBT细胞均表达HPVE6、E7蛋白,对照正常上皮细胞为阴性;p53、Rb蛋白在正常上皮中为强阳性,HIOEC细胞中阳性程度减弱,不同阶段HB细胞和HBT细胞中表达呈不同程度降低,P96皿细胞尤为明显。pI3-11非线性IPG等电聚焦,%,银染后较好地显示了各细胞系蛋白质点的分布,平均每张凝胶可以检测超过1600个蛋白质点;样品HB96、HB56、H的3次2D实验经软件PDquest匹配之后得到的两两比较之相关因子平均>,满足后继分析要求。样品HB96,I-IB56,H的3次2D实验经软件PDquest匹配之后得到平均匹配率大于80%。PDquest软件分析细胞系间两两比较,选择蛋白质丰度差异倍数在5倍以上的蛋白质点。其中P96HB细胞比P56HB细胞表达上调的蛋白质有7个,表达下调45个;P96聃细胞比HIOEC细胞表达上调的蛋白质有8个,表达下调42个;P56HB细胞比HIOEC细胞表达上调的蛋白质有4个,表达下调49个。对银染分析胶中差异蛋白质点进行编号,选择复杂性变化较大的区域I-XI中编号为3,5,12,24,32,33,36,36’,38,43,!塑奎望查竺垦堂堕!鲤丝堡!:竺竺丝塞50,5l,57,59共14个蛋白质点作质谱鉴定。其中3,5,36,36’,50,57,59质谱分析图谱较好,,S100calciumbindingproteinA8(calgranulinA1,ribosomalproteinP2,ribosomalproteinP2,Lasp一1protein,PREDICTED:similartocofilin2,AnnexinI蛋白。36,36’为同一蛋白,但其分子量和等电点发生改变。24,32,38,5l号点质谱分析图谱较好,但搜库无匹配蛋白;12,43号点质谱检测失败。