三氧化二砷对肝癌细胞株的体外抑制作用.doc

三氧化二砷对肝癌细胞株的体外抑制作用
作者:钟灿灿沈雁刘建伟陈志棠唐毅
【关键词】肝癌细胞
摘要:目的研究三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株HepG2,BEL7402的抑制作用。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测用As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL7402生长及抑制率的影响;凋亡电泳检测电泳条带,流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡率变化。~ μmol/L的浓度范围内As2O3对BEL7402、HepG2细胞的生长均有明显的抑制作用,且有时间和浓度的依赖性;凋亡电泳显示5 μmol/L As2O3对肝癌细胞株HepG2,%%;流式细胞仪DNA组方图上可见细胞G1前期出现亚二倍峰。结论 As2O3可抑制肝癌细胞株HepG2,BEL7402的生长,且在一定的范围内,抑制率具有一定的浓度和时间依赖性;As2O3对BEL7402细胞株的生长抑制作用大于HepG2;As2O3抑制肝癌细胞株HepG2,BEL7402生长的作用与细胞凋亡有关。
关键词:肝癌细胞;凋亡;三氧化二砷
三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)是中药砒霜的主要成分,在治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)取得了显著的临床效果[1],As2O3在实体瘤方面的治疗也逐渐增多[2]。As2O3治疗APL的有效浓度是10 μmol/L,而在体外抑制人肝癌细胞株HepG2的有效浓度有可能<5 μmol/L[3],本研究旨在观察As2O3对人肝癌细胞株HepG2和BEL7402生长的影响,以探讨As2O3对原发性肝癌的作用及其机制,为寻找有效的肝癌化疗药物提供实验依据。
1 材料与方法
材料与仪器
肝细胞株HepG2、BEL7402由中山大学细胞库提供,As2O3、四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自Sigma公司,RPMI 1640培养基购自Gibco公司,小牛血清购自杭州四季清公司,二甲基亚砜(DMSO,进口分装)。二氧化碳培养箱(SHELLAB,美国),酶标仪(Reder,日本)。
分组

本实验分为HepG2和BEL7402组:分别加入As2O3,终浓度为0(对照组)、、、1、5、10和50 μmol/L,以RPMI1640培养液稀释,观察不同浓度对肝癌细胞株的影响。
方法
细胞培养
在37 ℃、5%CO2培养箱,用含10%小牛血清及青霉素、链霉素各1×105 U的RPMI1640培养基培养,每2天换一次液,收集对数生长期的细胞进行实验。
MTT法观察As2O3对肝癌细胞株生长的影响。
取对数生长期细胞,用RPMI1640培养液调整细胞为6×104/mL,接种于96孔培养板,每孔100 μL细胞悬液,培养24 h待细胞贴壁后按实验分组加入不同浓度药物,每孔100 μL药物,对照组加入100 μL培养液,每组浓度4个重复孔,放入37 ℃、5%CO2培养箱培养72 h后,每孔加入MTT (5 mg/mL)20
μL,再培养4 h,弃上清液,每孔加入DMSO 200 μL振荡溶解10 min,待甲瓒完全溶解后进行比色,在酶标仪以570 nm主波长/690 nm参比波长检测吸光度A值,并