(中文)DIG High Prime DNA标记及杂交检测试剂 盒II.pdf

DIGHighPrimeDNALabelingandDetectionStarterKitIIDIGHighPrimeDNA标记及杂交检测试剂盒II说明书版本:Version12(2009年11月)利用随机引物法及DIG-dUTP(碱不稳定)进行DNA标记反应,采用酶联免疫方法及即用型化学发光底物CSPD进行杂交分子的显色。本试剂盒可对10ng-3μgDNA进行12次标记反应,可进行24次杂交检测反应(100cm2杂交膜)。产品目录号:**********试剂盒于-15~-25℃………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………-DNA标记……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………154附录………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………-HighPrime•50μl,用于DNA的随机引物法高效标记,即用•5×标记反应液,含浓度优化的随机引物、核苷酸、DIG-dUTP(碱不稳定)、Klenow酶及缓冲液。•澄清的粘性溶液2DIG-labeledControlDNA•20μl,用于确定反应标记效率•pBR328DNA(5μg/ml,BamHI线性化处理)•澄清溶液3DNADilutionBuffer•3×1ml•10mMTris-HCl,1mMEDTA(含50μg/ml鱼精DNA,,25℃)•澄清溶液4Anti-Digoxigenin-AP•50μlConjugate•750U/ml,Fab片段,羊源,结合了碱性磷酸酶•澄清溶液5CSPD,ready-to-use•50mlCSPD•碱性磷酸酶化学发光底物•澄清溶液6Blockingsolution•4×100ml•10×储液•黄色,粘性溶液7DIGEasyHybGranules•可制备成4×100ml溶液,见P13•杂交液杂交反应所需的仪器和其他反应试剂请根据您的实验操作流程准备杂交反应所需的仪器和其他试剂,参见下表:(本说明书)-DNA标记水浴设备•水,PCR级别•(),*DIGWashandBlockBufferSet*或•洗涤缓冲液•马来酸缓冲液••2×SSC或•10ו带正电荷的尼龙膜*3•杂交袋*或•耐热的封闭塑料袋或杂交滚筒注意:使用DIGEasyHyb作为杂交缓冲液时,•与杂交膜大小相适的容器DIGWashandBlockBuffer•杂交袋*Set*或•洗涤缓冲液•马来酸缓冲液••大托盘•10×SSC•水浴设备•10%SDS•*的试剂为罗氏应用科学部提供的试剂。(II)采用地高辛(DIG,一种甾类半抗原)进行DNA标记,所获得的探针用于后续的杂交反应,带有地高辛分子的杂交子通过酶联免疫反应进行化学发光检测。步骤描述DNA标记利用随机引物法和地高辛标记的核苷酸对DNA进行标记,获得探针。DIG-HighPrime为优化的5×预混反应液,包含地高辛标记的核苷酸DIG-dUTP(碱不稳定,图1),随机引物及标记级别