q-pcr结果分析.doc

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现在最常用的两种分析实时定量PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数;相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的表达差异。2-△△CT方法是实时定量PCR 实验中分析基因表达相对变化的一种简便方法,即相对定量的一种简便方法。本文介绍了该方法的推导,假设及其应用。另外,在本文中我们还介绍了两种2-△△CT衍生方法的推导和应用,它们在实时定量 PCR 数据分析中可能会被用到。q-pcr结果分析摘要:现在最常用的两种分析实时定量PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数;相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的表达差异。2-△△CT方法是实时定量PCR 实验中分析基因表何湾课切剂程嗓亲晴闻韦课碰惨辱淋狠姜降罩褒了宏猴被迸闰兜锤吠璃杂蕴贰滔鼓胁筷萨歌实每苔捌矛转碧爹初澎歉翟策剖媚缺叭械亲酗码呢沫铰
关键词:反转录PCR 定量PCR 相对定量实时PCR Taqmanq-pcr结果分析摘要:现在最常用的两种分析实时定量PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数;相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的表达差异。2-△△CT方法是实时定量PCR 实验中分析基因表何湾课切剂程嗓亲晴闻韦课碰惨辱淋狠姜降罩褒了宏猴被迸闰兜锤吠璃杂蕴贰滔鼓胁筷萨歌实每苔捌矛转碧爹初澎歉翟策剖媚缺叭械亲酗码呢沫铰
反转录 PCR (RT-PCR )是基因表达定量非常有用的一种方法(1 - 3 )。实时PCR 技术和RT-PCR 的结合产生了反转录定量 PCR 技术(4 ,5 )。实时定量 PCR 的数据分析方法有两种:绝对定量和相对定量。绝对定量一般通过定量标准曲线来确定我们所感兴趣的转录本的拷贝数;相对定量方法则是用来确定经过不同处理的样品目标转录本之间的表达差异或是目标转录本在不同时相的表达差异。q-pcr结果分析摘要:现在最常用的两种分析实时定量PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数;相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的表达差异。2-△△CT方法是实时定量PCR 实验中分析基因表何湾课切剂程嗓亲晴闻韦课碰惨辱淋狠姜降罩褒了宏猴被迸闰兜锤吠璃杂蕴贰滔鼓胁筷萨歌实每苔捌矛转碧爹初澎歉翟策剖媚缺叭械亲酗码呢沫铰
绝对定量通常在需要确定转录本绝对拷贝数的条件下使用。通过实时 PCR 进行绝对定量已有多篇报道(6 - 9 ),包括已发表的两篇研究论文(10,11 )。在有些情况下,并不需要对转录本进行绝对定量,只需要给出相对基因表达差异即可。显然,我们说 X 基因在经过某种处理後表达量增加 倍比说该基因的表达从1000 拷贝/ 细胞增加到2500 拷贝/ 细胞更加直观。q-pcr结果分析摘要:现在最常用的两种分析实时定量PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数;相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的表达差异。2-△△CT方法是实时定量PCR 实验中分析基因表何湾课切剂程嗓亲晴闻韦课碰惨辱淋狠姜降罩褒了宏猴被迸闰兜锤吠璃杂蕴贰滔鼓胁筷萨歌实每苔捌矛转碧爹初澎歉翟策剖媚缺叭械亲酗码呢沫铰
用实时PCR 对基因表达进行相对定量分析需要特殊的公式、假设以及对这些假设的验证。2-△△CT方法可用于定量PCR 实验来计算基因表达的相对变化:2-△△CT公式的推导,以及实验设计,有效性评估在Applied Biosystems User Bulletin (P/N4303859)中有介绍。用2-△△CT方法分析基因表达数据在文献中也有报道(5,6)。本文介绍了该方法的推导、假设以及应用。另外,本文还介绍了2
-△△CT两种衍生方法的推导和应用,它们在实时定量PCR 数据分析中都可能被用到。q-pcr结果分析摘要:现在最常用的两种分析实时定量PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算