血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量 实验报告.doc

螁膆肄蚂薈生物化学实验报告蕿蒄蒃蚀蚇姓名:膇膃学号:蚁螆专业年级:薆羃组别:;;。荿二、,。,在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同,在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白(Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。、分子量及含量袂血清蛋白质等电点分子量占总蛋白的%,00057~72蝿α1-,0002~5芅α2-,0004~9蚂β-,000~150,~12蒂γ-~,000~950,00012~20袇缓冲液pH=,pI<pH。蚅血清蛋白带负电荷,在电场中向正极移动。莃预测血清蛋白电泳区带图艿血清蛋白依次分为清蛋白,球蛋白的α1、α2、β、.①膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带;②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比;③可将各色带剪开,分别溶于碱性溶液中;④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。肃三、材料与方法::莈;②巴比妥-巴比妥钠缓冲液(,);③氨基黑10B染色液;④漂洗液;⑤洗脱液:。薃;②恒温水浴箱(×1);③试管(×6)、试管架(×1);④1000μL加样枪(×1)、加样枪架(×1);⑤醋酸纤维薄膜(2cm*8cm,厚度120μm);⑥培养皿(×5);⑦点样器或载玻片(×1);⑧平头镊子(×2);⑨剪刀(×1);⑩电泳槽(×1);⑪直流稳压电泳仪(×1):①取2×8cm的膜条;②;③充分浸透在巴比妥缓冲液中;④取出膜条,用滤纸吸去多余的缓冲液;⑤点样器下端粘上薄层血清;⑥垂直点样。蒆点样示意图:芇注意:点样线尽量点得细窄而均匀。薄腿+螈——(粗面)节艿小组标记薅薁聿样品标记莈羄芁膀薆莄电泳:①放置膜条(点样面向下,点样端置于阴极);②膜条贴紧滤纸,拉直膜条;③平衡五分钟;④通电(调节电压120v/电流,时间:45~60min);③关闭电源。肂电泳槽解剖图:、漂洗:①通电完毕;②取出膜条;③浸于染色液(氨基黑10B)中,5min;④取出膜条,浸于漂洗液;⑤反复漂洗2次,直至漂净;⑥滤纸吸干薄膜。(洗脱比色法)(因实验室等原因,未做)薂四、结果与讨论:-球蛋白的区带,其余无法区别。原因可能如下:①醋酸纤维薄膜质量不足②薄膜过湿,样品扩散迅速,导致样品分离不成区带。③点样太少,区