几种MIC的测定方法.doc

几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC) (试管) 将抗菌肽稀释到无菌水中,制成1024μg/ml的原液,(,但要去掉前面5ml的过滤抗菌肽溶液)。抗菌药物贮存液浓度按照不同梯度稀释。,药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值,特殊情况例外。 . 培养基 推荐使用LB肉汤培养基,~。指示菌为大肠杆菌或沙门氏菌。  有2种方法配制接种物,一是细菌生长方法,用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个,接种于4-5ml的LB肉汤中,35℃孵育2-6h。,约含1~2×108CFU/ml。二是直接菌落悬液配制法,推荐直接取培养18~。用LB肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。注意应在15分钟内接种完配制好的接种物,并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养,以检查接种物纯度。  取无菌试管(13×100mm)13支,排成一排,,其余每管加入LB肉汤1ml,在第1管加入抗菌药物原液(如1024μg/ml) ,然后吸取1ml至第2管,混匀后再吸取1ml至第3管,如此连续倍比稀释至第11管,并从第11管中吸取1ml弃去,第12管为不含药物的生长对照。此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、、。然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml,使每管最终菌液浓度约为5×105CFU/ml。第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、、、。 (注:在稀释的过程中,每次吸取1ml到下一管中后,要换掉枪头,后面的方法相同) 将接种好的稀释管塞好塞子,置37℃摇床培养16~20h。  在读取和报告所测试菌株的MIC前,应检查生长对照管的细菌生长情况是否良好,同时还应检查接种物的传代培养情况以确定其是否污染,质控菌株的MIC值是否处于质控范围。以肉眼观察,药物最低浓度管无细菌生长者,即为受试菌的MIC。或者用分光光度计测定OD600,与未接菌的比对,判断耐药(resistant, R)、敏感(susceptible, S)或中介(intermediate, I)。  (酶标板) 同常量肉汤稀释法。  无菌操作,将倍比稀释后不同浓度的抗菌药物溶液分别加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中,第1至第11孔加药液,每孔10μl,药物浓度分别为1280、640、320、160、80、40、20、10、5、、。 第12孔不加药作为生长对照,如果当时不使用,则冰冻干燥后密封,-20℃以下保存备用。  ,经LB肉汤1∶1000稀释后,向每孔中加90μl