大鼠肾素(RENIN)Elisa试剂盒使用说明书.docx

大鼠肾素(RENIN)Elisa试剂盒使用说明书大鼠肾素Elisa试剂盒使用说明书上海博谷生物科技有限公司用途本试剂盒仅供科研使用,定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中大鼠肾素的含量。原理: 采用双抗体夹心法测定大鼠肾素RENIN水平。用纯化的大鼠肾素RENIN抗体包被微孔板,制成固相载体,实验时依次在微孔板中加入样本及标准品,并加入HRP标记的RENIN抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,反复洗涤后加底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,再用硫酸终止反应,转变成黄色。颜色的深浅和样品中的RENIN含量呈正相关。采用酶标仪在450nm波长测定吸光度,根据标准曲线,计算测试样品中RENIN浓度。试剂盒组成序号**********备注名称规格酶标包被板96孔*1可拆卸板酶结合物10ml*1瓶标准品1ml*6瓶缓冲液6ml*1瓶显色剂A液6ml*1瓶显色剂B液6ml*1瓶终止液6ml*1瓶浓缩洗涤液10ml*~6的浓度分别为:0,50,100,250,500,1000pg/、体液以及组织匀浆样品的检测。实验材料与试剂配制: :酶标仪,微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水,滤纸。 :加5ul的缓冲液于50ul的样品中,如果样品量不够或者不确定,缓冲液和样品的混合比例不要小于1:10即可。混匀,静置1小时备用。:按1:100的比例配制洗液备用。样品收集、处理及保存 :适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液,以1000×g离心15分钟,收集上清。:用PBS反复洗涤细胞3次,调整细胞浓度达到104-106/ml左右,通过反复冻融,使细胞破坏并放出细胞内成份,或者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。 :在室温下,血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。 :应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置10-20分钟后,以1000×g离心15分钟,收集上清。 :包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集,以1000×g离心15分钟,收集上清。:切取组织标本,称取重量,加入500ul的PBS,用手工或匀浆器,或超声破碎仪将标本匀浆,以20XX-3000rmp离心20分钟,收集上清进行检测。 ,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的活性。 :如果样品不能立即检测,应将其分装,-70℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。操作步骤: 1 ,室温放置30分钟。 :取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组、空白孔、待测样品组。注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。 :依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入50ul的蒸馏水;其余微孔中加入50ul的待测样本。 :标准品组、待测样本组各孔中加入100ul的酶标溶液。:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。 :用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底拍干。:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。:在450nm波长读取各孔的OD值。注:读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹,读板时间控制在终止反应后的30分钟内,以免影响准确性。数据计算 :各标准品OD值减去底色即减去空白孔OD值,以6个标准品的OD值为纵坐标y,以标准品的浓度为横坐标x,绘制曲线图,如图示,并计算出回归方程y=ax+b。 ,计算各组样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际RENIN浓度。:/ml 注意事项: ,避免交叉污染。 :加样时,要控制加样速度,避免第一孔与最后一孔间的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响实验的准确性以及重复性。 :严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。 :加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀