高效感受态细胞制备试剂盒new说明书100T2.doc

产品编号:MCC027-petentCellPreparationKit是一种方便、高效、快速制备感受态细胞的试剂盒。使用本试剂盒制备的感受态细胞可以满足大多数实验的需要,并且适用于几乎所有常用的大肠杆菌,例如:、JM109、HB101、xl-1blue、等,转化效率均可以达到1×106cfu/μgpUC19以上(转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异)。使用本试剂盒制备的感受态细胞可以在-80℃保存一年。制品内容(100次量)SolutionA20mlSolutionB10ml保存条件:4℃保存。此产品仅供实验研究使用,请勿用于人及动物的临床医疗或者是食品添加剂等。产品咨询电话:010-89756825转8205注意事项:。洗刷这些玻璃器皿或塑料容器时应尽量洗净。由于微量的洗涤剂或污染物都可能降低感受态细胞的转化效率,因此在洗刷完用于制作感受态细胞的专用玻璃器皿或塑料容器后,最好用去离子水浸泡一晚,然后再充分洗净。,不应使用4℃或常温保存的传代细菌。应使用-70℃保存的菌种,在LB/抗生素平板培养基上分级划线培养后,挑取单菌落。使用这种菌种制作的感受态细胞,能提高转化效率。,OD600值的测定应随时进行,-。如果OD600值超出此范围,可能降低感受态细胞的转化效率。,不要将培养液过长时间室温放置,在冰中放置时也不要时间过长。,离心后弃上清时要尽量弃尽,否则会降低感受态细胞的转化效率。、SolutionB悬浮沉淀时要用手指轻轻弹动Microtube管壁,禁止剧烈震荡操作。,最好制作一批高纯度的质粒DNA分装低温(-20℃)保存,用作阳性对照,以确认每批制作的感受态细胞的转化效率。感受态细胞的制备步骤1、菌种纯化①使用LB/抗生素平板培养基(根据菌种性质加入适当的抗生素),用接种针挑取大肠杆菌(-70℃甘油保存菌),在平板培养基上分级划线,以能够出现单菌落为宜。②将上述划线的平板培养基倒置于恒温培养箱中37℃过夜培养。2、菌体培养①取20mlφb×broth移至100ml三角烧瓶中,塞上棉塞后高温高压灭菌,然后冷却至室温。②在划线平板培养基上挑取单菌落,接种到①的培养基中。③37℃振荡(约150rpm)培养。④测定OD600值,-(约培养5h)放置冰中停止培养(如果OD600值超出此范围将不能保证感受态细胞的转化效率)。⑤进行下一步操作。3、感受态细胞的制备①(根据需要量确定Microtube数量)。②1,500×g(一般的微型离心机约4,000rpm)4℃离心5min,弃上清(注意尽量除尽上清)。③在每个Microtube中加入200μl冰中预冷的SolutionA,轻轻弹动Microtube使沉淀悬浮,禁止剧烈振荡。④1,500×g(一般的微型离心机约4,000rpm)4℃离心5min,弃上清(尽量除尽上清)。⑤在每个Microtube中加入100