一种无载体无选择标记基因转化小麦方法的建立.pdf

大连理工大学
硕士学位论文
一种无载体无选择标记基因转化小麦方法的建立
姓名:仇泽
申请学位级别:硕士
专业:作物遗传育种
指导教师:安利佳
20080605
标记基因和载体骨架序列的最小基因表达框缓衭启动子、嘞基因、子房滴注转化法的粜月薯濉%8哂诨ǚ酃芡ǖ婪哟。此后,本文又从转化摘要随着转基因技术的广泛应用,转基因作物的安全性越来越引起入们的重视。其中在基因转化中普遍使用的选择标记基因和载体骨架序列是影响转基因作物安全性评价的两个重要因素。露前,基因枪和农杆菌转纯法均较难实现无载体燹标记基因的转化,面花粉管通道法则有望解决这一问题,虽然该方法也存在着转化效率低、重复性差等缺点。为了建立一种简便有效地进行无载体无标记基因转化小麦的方法,本文在对小麦花粉管通道法研究的基础上,提出了小麦的子房滴注转化法,并在转化中使用了不含选择终止子和呓缧蛄。本文首先对影响小麦花粉管通道法转化的几个可能因素的进行了初步研究,包括对花粉管生长情况的麓察和努源腇,异硫氰酸荧光素咀俟鄄臁F渲蠪咀儆职ü鄄熳;奔浜妥;芤憾酝庠碊进入小麦胚囊效率的影响,以及不同转化部位对外源敕绞降挠跋斓取=峁砻鳎谑诜螅÷蠡ǚ酃芸梢越胱臃浚煌撇馔庠碊沿花粉管延伸过程中形成的花粉管通道进入胚囊;转化部位对外源胱臃康姆绞接杏跋欤丝诩由睿庠碊进入的量相对较多;在授粉和以后进行转化,外源胄÷笈吣业男较高;相对于缓冲液,使用フ崽亲魑W;芤嚎梢运醵掏庠肱吣业氖蔽拧在以上实验结果的基础上,本文提出了小麦的子房滴注转化法。实际转化操作表明,时间和转化溶液组成等方面对前者进行了优化。结果表明子房滴注转化法在使用フ崽堑乃芤鹤魑W;芤海;奔湮时可以得到较高的转化率%;荧光观察表明,梢栽谧;蛑仓曛姓1泶铩综上所述,本文成功建立了一种有效的将无载体无标记基因导入小麦的转化方法,即子房滴注转化法。关键词:小麦转化;花粉管通道法;子房滴注法;颍蛔钚』虮泶锟一种无载体无选择标记基因转化小麦方法的建立
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独创性说明作者郑重声明:本硕士学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果,也不包含为获得大连理工大学或者其他单位的学位或证书所使用过的材料。与我~同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。作者签名:
竺槟辍辉隆蝗哆辱大连理工大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解“大连理工大学硕士、博士学位论文版权使用规定獯罅砉ご笱ПA舨⑾蚬矣泄夭棵呕蚧顾徒谎位论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阕。本人授权大连理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,也可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。』笪:.』:作者签名:导师签名:大连理王大学硕士研究生学位论文
吉随着转基因技术的广泛应用,转基因作物的安全性越来越得到人们的重视。其中在基因转化中普遍使用的选择标记基因和载体骨架序列都是潜在的安全隐患捌。本文首先就小麦转基因技术、选择标记基因和载体骨架序列的研究现状进行了综述,之后又对本文所使用的ǜ婊蚪辛私樯堋D壳埃蚯购团└司;ň岩允迪治拊体无标记基因的转化,而花粉管通道法则有望解决这一问题,虽然该方法也存在着转化效率低、重复性差等缺点。为了建立一种简便有效地进行无载体无标记基因转化小麦的方法,本文在对小麦花粉管通道法研究的基础上,提出了小麦的子房滴注转化法。在转化中本文使用了不含选择标记基因和载体骨架序列最小基因表达框缓衭启动子、颉终止子和呓缧蛄,以期得到无载体无标记基因的小麦转基因植株。本文对影响小麦花粉管通道转化的几种可能因素的研究,包括对花粉管的生长情况的观察和示踪外源墓鄄臁T诖嘶∩咸岢隽诵÷蟮淖臃康巫⒆;ㄖ螅又通过实际转化操作,来确定子房滴注法是否可以提高转化率。此后,又从转化时间和转化溶液组成等方面对该方法进行了优化。而为了验证最小基因表达框的转化效果,在觳庵螅疚挠侄訮阳性材料进行了杂交检测、.觳狻杂交检测以及荧光检测。一种无载体无标记基因转化小麦方法的建立己口
文献综述转基因小麦研究进展小麦转基因技术大体分为两类:一是农杆菌介导的基因转化;二是目标基因直接转化,包括基因枪法、花粉管通道法、显微注射法、激光微束穿刺法、榈己偷缁鞔孔法等,其中应用较为广泛的