pChAc-GFP与pCaMV-GFP载体构建及转基因初步研究.pdf

pChAc-GFP 与 pCaMV-GFP 载体构建及
转基因初步研究
生命科学学院生物技术专业隋己元
学号: 2002302036

【中文摘要】本研究拟通过构建转基因衣藻表达载体,期望获得高效表达的调控序列,以提
高衣藻表达系统的表达效率和拓宽他们的应用领域。通过设计带有酶切位点的引物,利用
PCR 技术从莱茵衣藻总 DNA 中克隆β-actin 基因启动子,从质粒 pBI121 中扩增 CaMV 35s
基因启动子,将两个启动子分别连接到 pH105G 表达载体构建成 pCHAc-GFP 和 pCaMV-GFP
重组质粒。两个重组质粒用 EcoR I 酶切后与 p124 质粒连接,获得 pCHAcG124 和 pCaMVG124
转化载体。然后通过“珠磨法”-849 莱茵衣藻,拟获得转 pChAc-GFP
和转 pCaMV-GFP 的重组基因衣藻。以 pH105G 转基因藻株作为对照,通过检测 GFP 的荧
光强度,分析β-actin 基因启动子和 CaMV 35s 基因启动子的调控能力。
【关键词】莱茵衣藻;β-actin启动子;CaMV 35s启动子;pH105G表达载体
【教师点评】本研究从基础的分子生物学工作研究入手,利用本课题组目前以有的质粒和综
合国内外关于衣藻基因表达调控序列研究的报道,拟在启动子调控序列的效率方面开展研究
工作。该研究涉及到的主要研究内容有引物设计、调控序列的扩增与回收、酶切分析、质粒
构建、转基因等,并成功构建了pChAc-GFP与pCaMV-GFP重组质粒。针对转基因研究,目前已
经完成了一批衣藻转基因,但目前还没有获得转基因衣藻。从本研究的整体研究工作来看,
较好完成了当初的研究任务。本研究实验设计合理、数据较为翔实,论文撰写的文献综述全
面。存在不足主要在于由于衣藻生长周期较长,要完成转基因衣藻筛选和GFP基因表达研究
的整体研究工作时间并不充裕.
点评教师:黎双飞副教授
Construction of pChAc-GFP and pCaMV-GFP
expression vector and primary research on ic
transformation of Chlamydomonas reinhardtii
【 Abstract 】 To obtain the high-efficiency expression regulating sequence for the
Chlamydomonas reinhardtii transgenic research and broad the Chlamydomonas expression system
application domain, This research cloned the beta-actin like gene promoter from the C. reinhardtii
genome and amplified the CaMV 35s promoter from the plasmid pBI121by polymerase chain
reaction (PCR), then they separately inser