人C1qAcDNA神经表达载体的构建及其在神经元中的初步表达.pdf

中国协和医科大学
硕士学位论文
人C1qAcDNA神经表达载体的构建及其在神经元中的初步表达
姓名:朱金桂
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:秦川

中文摘要中神经元等细胞能合成珻能被、以非抗体依赖性的方式的胶原蛋白样区,鼠蕴於0贰⒏彼崛〈巳薈中带正电荷的精氨酸从而影响了人;蚴竽P椭蠧的活化效率。在已建立的人;蚴竽P椭性僮H肴薈基因能更好地模拟脑的免疫本文采用从树突状细胞文库中分离得到的人链,通过谄淞蕉颂砑覺酶切位点,以它作为目的基因,酶切去除舳拥膒载体首尾“”连接,形成重组子。神经元特异性表达的人链转基因片段由启动予、人链和的承蜃槌伞为了检测人链转基因片段的有效性表达,本文采用的“”转染法将其导入原代培养的大鼠神经元,然后用—检测其表达。结果在本实验条件下未检测到表达,这可能与神经元的低转染效率有关。人链转基因片段正在转基因小鼠制作中。蔷洳固逋揪兜墓丶肿印=昀囱芯糠⑾郑珹病被激活,介导纳窬拘院兔庖叻从Γ铀偌膊〗獭T贏链炎症反应和神经变性。置于切得的启动子的调控之下,然后和经泄鸵娇拼笱妒可畚
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前言阿尔采默病’珹是一种常见的神经退行性疾病,琋以及大量的神经元丧失,主要病变部位在大脑皮层的颞叶、海马等区。“’可分为经典的致密斑和弥漫性斑。致密斑主要由纤丝状淀粉样肽猘,沉积构成,同时还存在活化的小胶质细胞、星形细胞,早期补体、、,补体抑制物,炎性细胞因子,蛋白水解的传统渗出反应。人们设想致密斑是一个慢性炎症反应的部位,能激活先天免疫反应⋯.这是一种免疫应答进化产生以前的伤口愈合和炎症过程中的古老机制昭’,从而加剧对细胞的损伤。近年来流行病学调查发现患有关节炎、麻风的病人中抗炎药的应用能减轻症状,抗炎治疗还能预防的发生。诸多资料表明,免疫炎症机制在姆⑸⒄怪衅鹱胖匾W饔茫琭的一部分神经毒性是通过免疫炎症反应进行的。补体系统的激活是老年斑中免疫反应的重要方面,魑>洳体途径中的一个关键分子,引起了人们的关注。近年来研究发现,中神经元、小胶质细胞等能合成珻能被、以非抗体依赖性的方式被激活,发挥生物学活性,如杀细胞作用、炎症介质作用、趋化作用、免疫粘附作用、调理作用等。罨螅鼓茉銮緼的纤丝化聚集,阻碍小胶质细胞清除臁;蚨锸悄壳把芯緼∫蚝鸵┪锷秆〉慕虾玫哪P停其典型的病理变化是老年斑,窬O宋酶及其抑制物,但是未发现明显的赴细胞、
一、,链间通过二硫键连接形成狟、狢二聚体。:褐骼锏嫠芸研涂急ぶ魃嗜粱呖楹拖喙氐男切蜗赴⑿〗褐氏赴奂活化,出现了认知、记忆功能障碍、行为紊乱等症状,但是却未观察到任何神经纤维缠绕及大范围的神经元丢失。。’人们推测这可能与转基因动物体内缺乏与人相互作用的辅助因子有关,如细胞因子、过氧化物酶、豢姑拥鞍酌浮⒉固宓取Q芯勘砻鳎∈驝被罨结合的关键区域,它们之间以电荷作用相结合。在这个区域小鼠天冬酰胺、脯氨酸取代了人写绾傻木ò彼幔虼思跞趿薈与带负电荷的非抗体激活物之间的离子作用力及幕罨剩赡进而导致了经榈嫉纳窬湫缘募跞酢!啊狙芯渴酝荚谙钟械腁磂愿玫啬D釧纳窬±肀肽链组成,础链、锤条,础链、捶肿恿糠直鹞两个~厶搴鸵桓鯟—厶宸枪布劢岷希槌山峁沟ノ弧C结构单位中,础链、碞端胶原蛋白样区嗷ゲ绕形成与胶原类似的陕菪峁梗珻端球状区纬汕形头部。电镜下,个胶原蛋白样陕菪闹胁客淝沟闷说囊话肫叫信帕胁⒘游V醒敫桑拷麮端的另一半在弯曲部分叉,形成鱿妇ィ罜端銮蛐瓮凡浚鼋峁箍崴苹ㄊ7疌庞大而复杂的分子结构赋予它以丰富的结合位点,可与体内多种分子相结合,发挥较广泛的生物学作用。哂械纳鲜龆嘀止δ芏加善銩虽然成功地复制了的程度显著低于人话被岵谢怯雈转基因动物中共表达人化。且桓鼍薹肿恿糖蛋白。一个肿佑醵链介导。目前人和小鼠、链基因已被克隆并完成了序列测定。人、链以’方向以瓸顺序定位于染色体.、
链基因不仅有高度同源性,而且其基因组结构一外显子的数目、区带。、蚍直鸪...其共同结构特征为:每一链基因各含有一个内含子,内含子均位于肿拥穆菪淝勘嗦的序列分隔。”’人和小鼠气、链基因的同源性分别为%、%、%。吹谋J匦钥赡苡肫涔δ艿闹匾P韵喙亍H撕托∈驝大小及间隔距离也极其相似。虻谋泶锏骺厣形囱芯壳宄炎有关。但;蛐∈笊形醇ǖ溃涑晒⒔幸嬗诮徊窖序列处,、颍琧、蚍直鹩目前蚯贸∈笠丫适溃っ鰿缺失与⑸鲂∏蛏究墓δ芗氨