人CD154基因真核表达载体的构建及在Eca109细胞中的表达.pdf

郑州大学
硕士学位论文
人CD154基因真核表达载体的构建及在Eca109细胞中的表达
姓名:张文豪
申请学位级别:硕士
专业:病理生理学
指导教师:董子明
20030501
人基因真核表达载体的构建及在细胞中的表达研究生张文豪摘要导师董子明郑州大学医学院病理生理教研室郑州背景:效应馨拖赴介导的抗原特异性细胞免疫反应在机体的抗肿瘤免疫反应中发挥关键性作用。但肿瘤抗原特异性可系睦┰龊特异性肿瘤杀伤活性的激发必须有馨拖赴母ㄖ氤墒斓氖魍蛔聪赴灾琢隹乖挠行У莩省/信号转导途径是介导馨拖赴辅助作用与诱导树突状细胞完全成熟并获得抗原递呈与免疫刺激能力的重要途径。琓粲赥基因家族成员,是一个由霭被嶙槌傻型跨膜糖蛋白,分子量饕K彩北泶镉谌嘶罨腃淋巴细胞、部分活化的皉淋巴细胞和馨拖赴砻妫遣斡牖逄匾煨韵赴庖哂Υ鸷吞逡免疫应答的重要免疫共刺激分子。鞍椎氖芴錍肿邮且桓鲇个氨基酸组成的涂缒ぬ堑鞍祝肿恿,属于芴宄易宄稍保珻肿臃布于赴⒌ズ讼赴⒛谄は赴⑹魍蛔聪赴,、巨噬细胞、上皮细胞、造血干/祖细胞及多种肿瘤细胞表面。/嗷プ饔貌唤鼋榈糂细胞活化、增殖、分化、抗体产生与类型转换,而且、馨拖赴淋巴细胞间分子与肿咏榈嫉乃蛐藕帕鞫堑骺豑淋巴细胞与活化、增殖,启动并维持机体特异性细胞免疫反应以及建立机体且湫вΦ墓丶孕藕抛5纪贰/藕抛5纪吩贒⒂墒旒胺⒒涌乖莩省⒚庖呒せ罟δ苤械淖用主要表现在:俳鳧鲋场⒎只氤墒欤系魑闯墒霥赴砻鍯等免疫辅助分子的表达。,⒙伺菔魍状细胞郑州大学届硕士学位论文人蛘婧吮泶镌靥宓墓菇ḿ霸贓赴械谋泶
俳鳧油庵芟蛄馨徒崆ㄒ萍癉诹馨徒崮诖婊睿黾恿馨徒崮诘莩士乖诱导较强的喾从跋赴拘訲细胞应答。黾覦置诖傺字⑿,。/共刺激信号协同/共刺激信号作用,抑制成熟馨拖赴鸄的发挥,而且在维持庖呒且渲衅鹬匾W饔谩疌岷霞せ頓琁,.,、淋巴结、脾脏的分布,增加肿瘤部位蟆⒏集。瑿/结合激活的能够拮抗肿瘤微环境中肿瘤细胞分泌的抑制性细胞因子如淖枰肿饔谩表面删肿咏岷嫌锌乖腄疌藕抛5技し⒑蟛恍鐲淋巴细胞辅助,直接激活馨拖胞产生针对靶细胞的特异性杀伤作用。琢鱿赴砻娴腃肿颖籆分子结合后因肿瘤细胞组织来源不同,去分化程度差异及分子表达的细胞膜表面分子背景不同而产生截然相反的效应。在低分级投榷裥赴裥灾琢觥霍奇金氏病、印相关淋巴瘤、膀胱癌上分子被肿咏岷洗ǖ菘沟蛲信号,促进肿瘤细胞存活与增殖。对卵巢癌、宫颈癌、恶性黑色素瘤、喉癌等肿瘤的研究显示这些肿瘤细胞膜上的分子被肿咏岷弦鹣赴芷谕V驮期,且可增强刺激物如细胞毒药物顺铂、甉、抗蜕窬0酚盏嫉凋亡。肿釉诟伟⒍喾⑿怨撬枇錾嫌隒肿咏岷虾蟮贾孪喾吹男вΓ可以促进肿瘤细胞增殖,也可增强肿瘤细胞凋亡。利用转染虻闹琢鱿赴及重组肿咏兄琢雒庖咧瘟频亩锸笛橛肓俅睮期研究结果鼓舞人心,显示了诱人的临床应用前景。目的:,延长有效递呈抗原的时间。,调表达对赴罨⒃,。和郑州大学届硕士学位论文琈一人蛘婧吮泶镌靥宓墓菇ḿ霸贓赴械谋泶
肿拥氖彻馨┫赴闑醪焦鄄熳H綜基因后细胞的细方法:应用淋巴细胞分层液密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,体外经せ小时后提取总肦甈和巢式际趵┰鋈薈的通用引物与巢式谙乱颬扩增一步鉴定食管癌细胞株后,:从せ畹娜送庵苎5ジ龊讼赴欣┰龀隽巳薈全长含两端舷掠我锾砑拥南拗菩阅谇忻窧Ⅻ制性内切酶肌盖蠵产物得到两个酶切片段,与预期结果一软件进行同源性分析显示ネ础N榷ㄗH緋质粒的细胞株能在浓度为痬腄≡衽嘌猩ぃ榷ㄗH虻腅赴赴镅匦苑⑸,〕隽宋榷ū泶肿拥腅赴辏H綜基因后细胞生物学特性的改变有待进行全面的观察分析与深入研究。关键词:载体构建;树突状细胞;免疫治疗胞生物学特性。全长,用狝克隆的方法构建克隆载体瓹质粒,」菇ㄕ婧吮泶镌靥錺稢,,初步观察稳定转染细胞的细胞生物学特性,.觳釩基因在转染细胞中水平的表达。盖形坏慵个保护碱基孟致。质粒籆用痯通用引物,┰龀隽嗽て谄巍V柿和质粒盖卸记谐隽四康奶醮质粒用/通用引物测序结果与章既薈序列虼嫒『臢瓵克隆;籆涮澹真核细胞转染;.卜肂人蛘婧吮泶镌靥宓墓菇ḿ霸贓赴