2、细菌分离培养、接种技术及生化.ppt

2、细菌分离培养、接种技术及生化一、培养基的种类和选择(一)(二)培养基培养基(culturemedium)是由人工方法配制而成的,专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。用途:①可用于细菌的分离纯化、传代和菌种保存②可用于研究细菌的生理生化特性③:⑴营养物质:水、蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、无机盐、鸡蛋和动物血清、生长因子(Vit、aa、嘌呤、嘧啶等)。⑵凝固物质:最常用的为琼脂(agar),它是从石花菜中提出来的一种半乳糖胶,100℃溶解,40℃凝固,可利用琼脂来改变培养基的物理性状(固体或半固体),它是理想的固体培养基的赋形剂,其本身不被细菌分解利用,也无营养作用。⑶抑菌剂和指示剂:不是细菌生长繁殖的必需物质,是制备细菌的选择、鉴别培养基和判断结果的需要。常用的抑菌剂有:胆盐、煌绿、亚硫酸钠、亚硒酸钠及一些染料和某些抗生素等。常用的指示剂有:酚红、中性红、甲基红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中国兰等酸碱指示剂,美兰为常用的氧化还原指示剂。:牛肉汤(牛肉浸液+1%蛋白胨+%)半固体培养基:~%agar固体培养基:营养物+2%agar按物理性状基础培养基:是其他培养基的基础,如普通肉汤、普通琼脂平板、斜面、高层营养培养基:BAP、罗-琴培养基、吕氏血清斜面选择培养基:SS平板、BS平板、Mac平板等鉴别培养基:糖发酵管、MIU、KIA、TSI等特殊培养基:厌氧培养基、⑴肉膏汤的制备:%牛肉浸膏+1%蛋白胨+%NaCl加热溶解,~,分装,121℃,20分钟高压灭菌冷后待用。可用于标本和细菌的增菌。⑵普通琼脂平板、斜面、高层:肉膏汤+2%agar,加热溶解,121℃,20分钟高压灭菌冷至50℃平皿→普通琼脂平板:分离纯培养和药敏倾倒试管(斜放)→普通琼脂斜面:增菌、保存细菌试管(直立)→普通琼脂高层:备用⑶血琼脂平板:普通琼脂平板营养物质灭菌冷至50℃+5%~10%脱纤维SRbc或RRbc,摇匀,倾倒无菌平皿,冷凝后即成血平板。常用于营养要求较高的细菌的分离纯培养和药敏。⑷半固体肉汤:牛肉汤(牛肉浸膏汤)+%~%agar→加热溶化→分装→高压灭菌→冷却即成。常用于保存菌种和观察细菌的动力。