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甘氨酰谷氨酰胺二肽对肠屏障功能保护作用的实验性研究
答辩人:
导师:
2012年5月22日
Contents
研究背景和目的
1
研究方法
2
研究结果
3
下一步计划
4
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研究背景
生理情况下,肠腔内含有大量的细菌、毒素、消化酶及食物残渣,小肠粘膜借助完整的粘膜屏障,将上述毒物局限于肠腔,称之为“肠屏障功能(IBF)”。它是肝移植、小肠移植、腹部手术中不可避免的术后并发症,易引起系统性炎症反应(SIRS)和多器官功能衰竭(MOF)
肠粘膜屏障由物理屏障、化学屏障、生物屏障和免疫屏障组成
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研究背景
谷氨酰胺(GLN)是DNA和RNA 合成的必需物质,是小肠粘膜上皮细胞增生的重要代谢组分,与预防肠粘膜萎缩、促进淋巴细胞增生、加强肠道免疫屏障有紧密的相关性,但其单体溶解度低、水溶液中的化学不稳定性,易形成毒性的焦磷酸盐,限制临床应用
甘氨酰谷氨酰胺(GLY-GLN)是一种在体内可分解为GLN且具有高度溶解性和稳定性的人工合成的二肽,可耐受高温消毒;并且小肠粘膜存在特异性的二肽载体,即使IBD,仍可高速转运二肽
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研究内容
本实验采用大鼠肠系膜上动脉(SMA)夹闭60min,制造小肠缺血再灌注损伤的动物模型,采用氨基酸灌胃,研究GLY-GLN对肠屏障功能的保护性作用
重点分析肠粘膜免疫屏障的相关因素,主要探讨淋巴细胞和相关细胞因子的改变
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研究方法—实验方案(50 SD 大鼠分为五组)
Control
I/R
ALA
GLN
GLY-GLN
每天灌胃2ml生理盐水,7天,仅假手术
每天灌胃2ml 生理盐水,7天,第4天-60min缺血
每天灌胃600mg/kg 丙氨酸,7天,第4天-60min缺血
每天灌胃600mg/kg GLN,7天,第4天-60min缺血
每天灌胃600mg/kg GLY-GLN,7天,第4天-60min缺血
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研究方法—实验方法
每天称重并记录,观察生存率
测定门静脉Endotoxin、血清中TNF-a 和IL-6;内毒素:鲎试剂盒的显色基质法; TNF-a 和IL-6的测定:ELISA 法测定
细菌移位:肝、脾、肾、MLN、肺细菌培养并计数
ELISA 法测定回盲部sIgA的水平
取距回盲部3cm回肠,做病理分析(HE染色)
取空回肠的集合和肠系膜淋巴结,计数并称重
适量淋巴结进行FCM分析,台盼蓝染色做淋巴细胞计数,CD3、CD4、CD8、αβTCR、γδTCR抗体进行淋巴细胞亚群分析
结果统计: 进行统计分析
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研究结果—死亡率和体重变化量
各组间的死亡率无显著差异
体重变化量
vs. Control **p<
vs. I/R group ##p<
与Control相比,缺血手术后大鼠体重均明显下降
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研究结果—小肠病理
Control组:正常的肠粘膜结构:粘液层、上皮层、固有层、粘膜肌层
I/R组:粘液层消失、绒毛上皮细胞脱落坏死,绒毛残缺、粘膜溃疡形成
ALA组:小肠粘膜厚度、绒毛高度、隐窝深度变小
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研究结果—小肠病理
GLN组:粘膜厚度、绒毛高度、隐窝深度基本接近正常
GLY-GLN组:粘膜厚度、绒毛高度、隐窝深度基本接近正常
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