HPLC法测定复方胆通片中绿原酸的含量.doc

HPLC法测定复方胆通片中绿原酸的含量
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:靳国印张世敏白雪梅田嘉铭
【关键词】原酸
复方胆通是临床常用的治疗急慢性胆囊炎,胆管炎,胆囊、胆管结石并感染,胆囊术后综合征,胆道综合性疾患等的中成药。具有清热利胆、解痉止痛的作用。由茵陈、胆通、溪黄草、穿心莲、大黄组成。方中君药茵陈主含6,7二甲氧基香豆素、绿原酸等成分[1]。本文建立了测定复方胆通片中茵陈的绿原酸含量的 HPLC法,为评价该制剂中茵陈的质量指标提供依据。
1 仪器与试药
HP1100高效液相色谱仪(Aglient公司产品,包括在线脱气机,四元泵,柱温箱,VWD紫外检测器,3D化学工作站)。分析天平1/100000(日本产)。乙腈为色谱纯,水为三蒸水;磷酸为分析纯。绿原酸标准品(中国药品生物检定所,批号:07532000111供含量测定用)。复方胆通片(广东信宜市制药厂生产,批号:040102 043102 040502)。
2 方法与条件
色谱条件 Hypersil BDS C1
8色谱柱(×250mm,10μm),检测波长327nm, 柱温30℃,进样量20μl,流动相乙腈:%的磷酸水溶液,梯度洗脱,程序见表1。色谱图见图1、2、3。表1 梯度洗脱情况
溶液的制备
对照品溶液的制备精密称取一定量的绿原酸对照品,用流动相乙腈:%的磷酸水溶液=5∶95定容,制备成每毫升中含绿原酸1mg的标准液备用。
,用流动相乙腈:%的磷酸水溶液=5∶95溶解并稀释至刻度,超声提取30min,取出,,放4℃冰箱备用。
阴性对照液的制备按处方中药味的比例,自配不含茵陈的群药,按其工艺制成阴性对照,再按供试品溶液的制备方法制备并测定。结果阴性对照液在与绿原酸对照品相同保留时间处无色谱峰,故认为无干扰。
线性关系考察将绿原酸对照品溶液用流动相乙腈:%的磷酸水溶液=5∶95稀释,、、、、、·ml-1 的对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液20μl注入液相色谱仪,测定峰面积积分值,以峰面积积分值(Y)为纵坐标,含量(X)为横坐标作图,得标准曲线。回归方程为Y=-,r =,~ mg
·ml-1范围内线性关系良好。
精密度试验
取同一供试品溶液, 重复进样5次, 每次20μl,,计算RSD为 %。
稳定性试验
取待测样品溶液,分别于0、1、3、5、8h进样20μl,结果表明供试品中绿原酸在8h内稳定, %。
重复性试验
精密称取一定量的同批样品5份,, mg·g-1, 计算RSD2%(n=5), 结果表明mg·g-1此法重复性良好。
加样回收率试验
精密