FOLINWU法测定血液葡萄糖含量.doc

一、目的学会用Folin—Wu法测定血液中葡萄糖含量。二、原理葡萄糖的半缩醛羟基具有还原性,在加热条件下可使碱性铜试剂中的Cu2+还原为黄色的氧化亚铜沉淀,而其本身被氧化为羧基。氧化亚铜可使磷钼酸还原成蓝色的钼蓝,蓝色的深度与葡萄糖的浓度成正比,故可用比色法测定钼蓝的光吸收值来测定葡萄糖的浓度。3Cu2O+2MoO3→6CuO+Mo2O3(氧化亚铜)(钼蓝)血糖即指血液中存在的葡萄糖。由于血液中成分复杂,尤其有许多种蛋白质存在,它们对血糖的测定会产生干扰。因此,目前常用钨酸法处理抗凝血来制备无蛋白滤液,然后用来测定无蛋白滤液中的葡萄糖含量。Na2WO4+H2SO4→H2WO4+Na2SO4(钨酸钠)(钨酸)在测定过程中,由于空气中的氧对Cu2O会产生再氧化作用从而影响测定结果,因此实验中要采用特制的福林—吴宪血糖管——有一细颈,可以尽量减少与空气的接触。(图23-1)12图23-1血糖管和奥氏吸管1.(Folin-吴宪式)、材料、试剂和器具(一)材料饥饿16小时的鸡或兔(二)试剂1、草酸钾()2、%苯甲酸溶液3、10%钨酸钠溶液称取10g钨酸钠,用双蒸水溶解后定容至100ml。4、1/3mol/L硫酸溶液5、标准葡萄糖溶液(),用苯甲酸水溶液溶解后定容至1000ml,其浓度为1mg/ml。可长期保存使用。使用时用蒸馏水稀释,。6、碱性铜试剂分别称取40g无水碳酸钠、、,用蒸馏水溶解后混合,定容至1000ml。本试剂于室温下可长期保存使用,若有沉淀产生,应过滤后再使用。7、磷钼酸试剂称取70g钼酸、10g钨酸钠,量取10%氢氧化钠400ml及蒸馏水400ml,于烧杯中混合加热20~40min(以除去可能夹杂于钼酸中的氨),冷却后加入85%磷酸250ml,混匀后定溶至1000ml..(三)器具1、剪刀2、烧杯3、试管与试管架4、玻璃棒5、奥氏吸量管(见图23—1)6、血糖管(见图23—1)7、小漏斗8、可见光分光光度计9、水浴锅10、移液管11、电炉12、天平13、容量瓶四、操作步骤(一),以制备抗凝血。。。小心擦去管外血液后,于试管底部缓缓放出血液。吸取试管内蒸馏水吹洗吸管数次后,充分摇匀,使血液完全溶血。注意不要使血液粘附于奥氏吸量管壁。,摇匀后放置5min。%钨酸钠溶液1ml,边加边摇,、收集滤液备用。若滤液不清,应重新过滤直至滤液澄清为止。至此,所制得的无蛋白滤液为20倍稀释的无蛋白血滤液,..(二)血糖的测定取血糖管3支,按下表进行编号后操作。血糖管编号试剂(ml),沸水浴中煮8min,勿摇动取出,。。(三)血糖浓度计算结果如下:每100ml血液