鳖甲抗肝纤维化活性组分的研究.doc

鳖甲抗肝纤维化活性组分的研究
作者:唐尹萍,胡春玲,施婧妮,高建蓉,姚航平,刘焱文
【摘要】目的筛选鳖甲抗肝纤维化的活性组分。方法传代培养的HSC-T6与鳖甲Bj61~Bj68共同培养72h后,采用MTT比色法测定各浓度组HSC-T6的增殖情况。结果 Bj61~Bj65和Bj68对HSC-T6细胞无抑制作用,而Bj66和Bj67有较强的抑制作用。结论 Bj66和Bj67为鳖甲的活性组分。
【关键词】鳖甲;活性组分;MTT比色法
[Abstract] Objective To screen the active constituent from Carapax Trionycis. Methods Secondary culture HSC-T6 in vitro,which was co-cultrued with Bj61-Bj68 ,then MTT assay was applied to detect the impacts of Trionyx sinensis at different concentrations on HSC-T6. Results Bj61 - Bj65 and Bj68 had no inhibitory effect on HSC - T6 cells, but Bj66 and Bj67 had a stronger inhibitory effect on HSC - T6 cells. Conclusion Bj66 and Bj67 is the active constituent from Carapax Trionycis.
[Key words] Carapax Trionycis ;active constituent;MTT
鳖甲为鳖科动物鳖 Trionyx sinensis Wiegmann 的背甲,具有滋阴潜阳、软坚散结、退热除蒸的功效[1]。鳖甲常用于治疗慢性肝病、预防肝硬化[2~4], 是治疗肝纤维化疾患的常用中药,但鳖甲的活性成分鲜见报道。本实验依据活性筛选的思路, 在高建荣等[5]确定分子量小于6000的多肽为鳖甲抗肝纤维化活性部位的基础上,采用葡聚糖凝胶G-25、葡聚糖凝胶G-15进一步分离为8个组分,再用MTT比色法进一步筛选鳖甲抗肝纤维化的活性组分,为后续的筛选活性单体奠定了基础。
1 材料与方法
材料
对象大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)由浙江大学附属第一医院肝病研究所提供。
试验药物及主要试剂(1)试验药物:鳖甲(醋制品)由浙江衢化医院提供,粉碎后过80目筛。(2)细胞培养试剂:胰蛋白酶(trypsin)、非必需氨基酸(NEAA)、 High-DMEM培养基,GIBCO产品;胎牛血清,武汉三利生物技术有限公司产品;青霉素、链霉素,华北制药股份公司产品;二氧化碳(CO2),武汉市明辉气体科技有限公司。(3)细胞增殖用试剂:二甲基亚砜(DMSO)、噻唑蓝(MTT),武汉凌飞科技有限公司。(4) 葡聚糖凝胶G-25、葡聚糖凝胶G-15:北京慧得易公司。
仪器 CO2培养箱,日本 SANYO公司产品;全自动酶标仪,美国 Bio-Rad公司产品;倒置相差显微镜,日本Olympus公司产品;洁净工