课件-transfectionQuestion:欲研究基因A在动脉粥样硬化发生发展中的功能,如何设计实验?DNA重组 ??重组DNA技术相关概念克隆(clone)来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。克隆化(cloning)获取同一拷贝的过程,即无性繁殖。克隆的三个层次:分子克隆(molecularclone),即DNA克隆细胞克隆个体克隆(动物或植物)DNA克隆应用酶学方法,在体外将各种来源的遗传物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工合成的DNA)与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子—复制子(replicon),继而通过转化或转染宿主细胞,筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增提取获得大量同一DNA分子,也称基因扩增或重组DNA。DNA克隆的基本原理1、目的基因的获取2、克隆载体的选择和构建3、外源基因与载体的连接4、重组DNA导入宿主细胞5、重组体的筛选6、克隆基因的表达细胞转染技术概念基因转染:将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能。基因转染技术:将纯化的含有靶基因的质粒DNA送入细胞内,并在细胞内表达。基因转移技术已广泛用于基因的结构和功能分析、基因表达与调控、基因治疗与转基因动物等研究。转染的分类
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