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不确定度————————————————————————————————作者:————————————————————————————————日期: LaPO4:Eu3+-BSA中BSA含量测定的不确定度评定实验目的采用荧光分光光度计对系列LaPO4:Eu3+标记的BSA标准溶液进行测定,绘制校准曲线,然后对未知BSA含量的溶液进行测量,根据校准曲线从而确定该物质中BSA的含量。测量方法采用荧光分光光度法进行测定:量取一定量的LaPO4:Eu3+溶液,加入pH=,然后加入一定量的EDC和NHSS,在振荡器中振荡15min,然后加入不同体积的BSA,,再放入振荡器中振荡30min。如此得到一系列LaPO4:Eu3+标记的BSA溶液,然后用荧光分光光度法在波长253nm处测定溶液的荧光强度,根据工作曲线从而确定该物质中BSA的含量。工作原理荧光分光光度计由光源氙弧灯发出的光通过切光器使其变成断续之光以激发单色器变成单色光,此光即为荧光物质的激发光,被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光,经过单色器变成单色荧光后,照射于测试样品用的光电倍增器上,由其所发生的光电流经过放大器放大输至记录仪,激发单色器和荧光单色器的光栅均由电动机带动的凸轮所控制,当测绘荧光发射光谱时,将激发光单色器的光栅固定在最适当的激发波长上,所记录的光谱即为发射光谱,简称荧光光谱。当用荧光分光光度计进行标准溶液测量时,将激发光单色器固定在所选择的激发波长处,将荧光单色器调节到所选择的荧光波长处,由记录仪得出的信号即是标准溶液的荧光强度。(BSA)=10-6(ρ1-ρ0)V/m式中 w(BSA)———LaPO4:Eu3+-BSA中BSA的质量分数,%;ρ1———工作曲线上查得的LaPO4:Eu3+-BSA样品中BSA的质量浓度,μg·mL-1; ρ0———工作曲线上查得的空白溶液中BSA的质量浓度,μg·mL-1; V———定容体积,mL; m——合成LaPO4:Eu3+-BSA样品的质量,g。3确定不确定度来源在测定溶液中BSA的质量浓度为0~12μg·mL-1范围内,该方法测量结果的偏差与影响测定结果的参数的控制有关。影响测定结果的参数主要包括质量、体积、温度、时间、仪器等。另外,本次评定中要绘制BSA含量的工作曲线,因此附加参数有荧光强度(I)、溶液中BSA的质量浓度(ρ)以及溶液的体积(V)。通过分析,测量影响因素的因果图如图1。称样重复性线性工作曲线透透射比波长称样移液管校准比色皿容量瓶透射比校准线性波长校准移液管容量瓶体积温度工作曲线荧光强度图1 :重复性、可读性、天平的灵敏度和线性产生的不确定度分量。(1),按三角形分布,由重复性带来的标准不确定度为:/=(2),按三角形分布,由可读性带来的标准不确定度为:/=(3)同一台天平因称量范围很小,灵敏度带来的不确定度忽略不计。(4)天平制造商提供的技术标准要求线性为±,按均匀分布,由线性引起的标准不确定