免疫学技术知识简介.ppt

免疫学技术知识简介1. ELISA的原理2. ELISA的类型3. 试剂准备:免疫吸附剂结合物酶底物的准备4. 对照设定5. 标本的采取和保存6. 结果判断ELISA是一种免疫测定(immunoassay,IA)。基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,由此进行定性或定量分析。1. ELISA的原理酶免疫测定类型这种固相酶免疫测定方法在1971年最初建立时称为酶联免疫吸附剂测定(EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay),简称ELISA。 可逆性抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡,其反应式为:Ag+Ab→Ag·Ab抗体的亲和力(affinity),可以用平衡常数K表示:K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab],Ag·Ab的解离程度与K值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合,两者结合牢固,不易解离。解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性。 特异性抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。化学结构和空间构型互补关系,具有高度的特异性。测定某一特定的物质,而不需先分离待检物。 敏感性化学比色法的敏感度为mg/ml水平酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿标记的免疫敏感度可提高数千倍,达ng/ml水平例如,HBsAg,。 免疫测定在临床检验中的应用由于各种抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制备特异性的抗血清或单克隆抗体,利用此抗体作为试剂就可检测标本中相应的抗原,因此免疫测定的应用范围极广。2 ELISA的类型ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂:(1)固相的抗原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate);(3)酶反应的底物。可设计出各种不同类型的检测方法。