AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程.docx

文件名称AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程使用维护标准操作规程颁发部门制订人:复核人:批准人:质保部制订日期:复核日期:批准日期::确保荧光定量PCR仪能够正确和正常的使用,保证扩增及结果分析的标准化、规范化。范围:适用于AB7500荧光定量PCR仪的使用及维护。定义:无职责:荧光定量PCR仪使用人员负责本规程的实施。质保部对本规定的有效执行承担监督检查责任。内容:~30℃,相对湿度45~75%。,进入Windows界面。,预热10分钟。,打开软件。,待托盘弹出后,将所需检测的8联PCR反应管或者96孔PCR反应板放入检测孔位,记下放置位置。检测8联PCR反应管用**反应孔模块,检测96孔PCR反应板用**反应孔模块。(检测8联PCR反应管需放入盖紧管盖的空8联PCR反应管配平,检测96孔PCR反应板无需配平)。:例如新建一个UG-63-62的模板,扩增参数是95°,10′;(95°,10″;63°,45″)×5cycles;(95°,10″;62°,35″)×40cycles,在62°时收集荧光信号(HEX、FAM信号),20μl反应体系。在Setup-PlateSetup-argetsandSamples中,将TargetName下的Target1改成FAM;点击AddNewTarget,将新增的Target1改成HEX,点击Reportee下拉菜单,选择VIC。Method-GraphicalView中的ReactionVolumePerWell后面输入20(20μl反应体系)。选中第一个HoldingStage,点击DeleteSelected删除;在CyclingStage中的NumberofCycles后输入5,在Step1中输入时间10秒,在Step2中输入温度63度,输入时间45秒,将63度下面收集荧光图标点掉;点击AddStage下拉菜单选择Cycling,在CyclingStage中的NumberofCycles后输入40,在Step1中输入时间10秒,在Step2中输入温度62度,输入时间35秒,在62度下面点击图标收集荧光。点击Save下拉菜单下的SaveAsTamplate,文件名输入UG-63-62,保存在默认ab7500-config-tamplates文件夹内,关闭设置界面。:在软件Home界面中点击Template,选择需要的模板,点击打开。例如:UG-63-62,其扩增参数就是95°,10′;(95°,10″;63°,45″)×5cycles;(95°,10″;62°,35″)×40cycles,在62°时收集荧光信号(HEX、FAM信号),ReactionVolumePerWell:20μl(20μl反应体系)。-PlateSetup-AssignTargetsandSamples中选择8联管摆放的位置,全部勾选Sample1;UGT1A1*6勾选HEX,UGT1A1*28勾选FAM。-AmplificationPlot中点击STARTRUN,命名为-1(当日日期+当日上机次数,例:2014年1月1日第1次上机编号为-1),保存在默认文件夹中,开始运行。结果分析PCR反应结束后自动保存结果,对扩增曲线进行分析。也可根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以(用户可根据实际情况自行调整,Start值可以在3~15、End值可设在5~20),Threshold值(Rn)推荐设定为5000~15000,点击Analyze进行分析,然后到Plate窗口下记录每个反应的Ct值。,顺序关闭AB7500软件、定量PCR仪电源,关闭电脑。。如需要,将实验文件归档或备份。•至少每周检查一次计算机磁盘空间。•如果硬盘的可用空间不足其总容量的20%,应将较陈旧的数据传输到备份存储设备上保存。关闭控制7500Instrument的计算机,30秒后再次开启计算机。用无绒布块(不脱毛)蘸取75%酒精清洁7500Instrument的表面。(注:切勿使用有机溶剂清洁7500Instrument。)使用75%酒精浸泡反应管托架(晾干后放回仪器内)。。(可执行一次背