AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程.doc

AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程
SOP04006 Page 1 / 29
1. 目的:
确保荧光定量PCR仪能够正确和正常的使用,保证扩增及结果分析的标准化、规范化。
2. 范围:
适用于AB7500荧光定量PCR仪的使用及维护。
3. 定义:
无
4. 职责:
荧光定量PCR仪使用人员负责本规程的实施。
质保部对本规定的有效执行承担监督检查责任。
5. 内容:
室内温度控制在15~30℃,相对湿度45~75%。
仪器操作
依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关,进入Windows界面。
接着打开AB7500仪器电源开关,预热10分钟。
点击7500 Software ,打开软件。
按压仪器托盘上的按压位,待托盘弹出后,将所需检测的8联PCR反应管或者96孔PCR反应
板放入检测孔位,记下放置位置。检测8联PCR反应管用**反应孔模块,检测96孔PCR反应板用**反应孔模块。(检测8联PCR反应管需放入盖紧管盖的空8联PCR反应管配平,检测96孔PCR反应板无需配平)
再次按压托盘使其滑入仪器。
SOP04006 Page 2 / 29 新建扩增参数模板:例如新建一个UG-63-62的模板,扩增参数是95°,10′;(95°,10″;63°,
45″)×5 cycles;(95°,10″;62°,35″)×40 cycles,在62°时收集荧光信号(HEX、FAM信号),20μl反应体系。
在Setup-Plate Setup-Define Targets and Samples中,将Target Name下的Target1改成FAM;
点击Add New Target,将新增的Target1改成HEX,点击Reportee下拉菜单,选择VIC。
-Run Method-Graphical View中的Reaction Volume Per Well后面输入20(20μl反应
体系)。选中第一个Holding Stage,点击Delete Selected删除;在Cycling Stage中的Number
of Cycles后输入5,在Step1中输入时间10秒,在Step2中输入温度63度,输入时间45秒,
将63度下面收集荧光图标点掉;点击Add Stage下拉菜单选择Cycling,在Cycling Stage中
的Number of Cycles后输入40,在Step1中输入时间10秒,在Step2
中输入温度62度,输
入时间35秒,在62度下面点击图标收集荧光。
点击Save下拉菜单下的Save As Tamplate,文件名输入UG-63-62,保存在默认
ab7500-config-tamplates文件夹内,关闭设置界面。
已有扩增参数模板:在软件Home界面中点击Template,选择需要的模板,点击打开。例如:
UG-63-62,其扩增参数就是95°,10′;(95°,10″;63°,45″)×5 cycles;(95°,10″;62°,35″)×40 cycles,在62°时收集荧光信号(HEX、FAM信号),Reaction Volume Per Well:20μl(20μl反应体系)。
在Setup-Plate Setup-Assign Targets and Samples中选择8联管摆放的位置,全部勾选Sample 1;
UGT1A1*6勾选HEX,UGT1A1*28勾选FAM。
在Run-Amplification Plot中点击START RUN,命名为20140101-1(当日日期+当日上机次数,
例:2014年1月1日第1次上机编号为20140101-1),保存在默认文件夹中,开始运行。
结果分析
PCR反应结束后自动保存结果,对扩增曲线进行分析。
也可根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以(用户可根据实际情况自行调整,Start
值可以在3~15、End值可设在5~20),Threshold值(Rn)推荐设定为5000~15000,点
击Analyze进行分析,然后到Plate窗口下记录每个反应的Ct值。
(切勿打开管盖),顺序关闭AB7500软件、定量PCR仪电源,关闭电脑。
仪器维