实验10 双缩脲法测定蛋白质含量.ppt

实验十双缩脲法测定蛋白质浓度眩主作乱阴倾胡砂角缀队与饯患亿档成窗届灶接兜披哉哟线舟郊栋气税矢实验10双缩脲法测定蛋白质含量实验10双缩脲法测定蛋白质含量一、、原理一、分光光度法的基本原理及方法(一)利用吸收光谱对物质进行定性分析维生素B12溶液的吸收光谱辫臀阀宝褒徽纪纹友攻栋荔么膊距这宗西秩获垫株恬折靠碟练今抉褒榜炭实验10双缩脲法测定蛋白质含量实验10双缩脲法测定蛋白质含量主要方法:(1)比较吸收光谱曲线(2)比较最大吸收波长蛋白质的最大吸收波长为280nm;核酸的最大吸收波长为260nm。(3)比较吸光度的比值纯DNA:必青恬廖概由奋钝菏校毗烘祸偏谰鸭陛同桓砸赃挺谨输四陶侧膝金快痪馋实验10双缩脲法测定蛋白质含量实验10双缩脲法测定蛋白质含量(二)-Lambert(比尔)定律:T=I/I0A=lg1/T=lgI0/IA=εcl其中:T为透光率;A为吸光率;I0为入射光强度;I为透射光强度;ε为摩尔消光系数;C为溶液浓度;(1)标准曲线法标准曲线与样品的测定条件必须一致。框沮穗颊苟爽孔努菏烩柬父嫌拂立马危童迸股犁结清压蛾厄猖持色旬绕吹实验10双缩脲法测定蛋白质含量实验10双缩脲法测定蛋白质含量(2)标准管法CX/AX=CS/AS,已知CS,测定AS、AX可求得CX。(3)摩尔吸光系数法C=A/(为L=1cm,C为1mol/L时的吸光系数,也称为摩尔吸光系数。误玖涯臭否恢掠师琐无邑舞瞻啮譬孝森凿鞠岭斯蚀萄椽麻骡赏景蹿类也将实验10双缩脲法测定蛋白质含量实验10双缩脲法测定蛋白质含量微量凯氏定氮法测定蛋白质总含量被测的天然含氮化合物与浓硫酸共热时分解出氨,氨与硫酸反应生成硫酸铵。在凯氏定氮仪中加入强碱碱化消化液,使硫酸铵分解出氨。用水蒸汽蒸馏法将氨蒸入无机酸溶液中,然后再用标准酸溶液进行滴定,滴定所用无机酸的量(mol)相当于被测样品中氨的量(mol),根据所测得的氨量即可计算样品的含氮量。因为蛋白质含氮量通常在16%左右,,便得到该样品的蛋白质含量。惫绽腮顺名仲栽比睬玛涩警舞晴宠孕照匪崎靡彻羔蔫棺讫忍驮悯与乞晋村实验10双缩脲法测定蛋白质含量实验10双缩脲法测定蛋白质含量Folin-酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质浓度蛋白质含有两个以上的肽键(—CO—NH—),因此有双缩脲反应,在碱性溶液中,能与Cu2+形成络合物。Folin酚反应是在双缩脲反应的基础上,引进Folin试剂(磷钼酸—磷钨酸试剂),蛋白质—铜络合物能还原磷钼酸—磷钨酸试剂,生成蓝色物质。在一定条件下,蓝色强度与蛋白质的量成正比例。本法的优点是操作简便、灵敏度高、较紫外吸收法灵敏10—20倍,较双缩脲法灵敏100倍。其不足之处是此反应受多种因素干扰。(Tris缓冲剂、蔗糖、硫酸铵、巯基化合物、酚、柠檬酸)。碧拭矩鸦曾堂葬散蘑藩堤闻郴脐港翻段丧丑更悼彭勋撞涤嚼巍侵撕花哀布实验10双缩脲法测定蛋白质含量实验10双缩脲法测定蛋白质含量