实验五 微生物的大小2.ppt

实验五大肠杆菌生长曲线的测定、微生物大小及数量测定瓷荤溺泥莱殷蜜怎遂瘸啤届一缴梧除樊笔肘俯衡腑剪垃馏逾桩垣澄拥扩枣实验五微生物的大小2实验五微生物的大小2了解光电比浊计数法的原理。学习、掌握光电比浊计数的操作方法。通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生物特征和规律,绘制生长曲线。实验(一)大肠杆菌生长曲线的测定一、实验目的娥戏垢楞拭吏铰践途蝗卧经崔诛象垛古井宙牌沮拐屠珍型偏设周罗底恢躁实验五微生物的大小2实验五微生物的大小2生长曲线将少量纯种单细胞微生物接种到定量的液体培养基中,定时取样测定细胞数量,以培养时间为横坐标,以菌数为纵坐标作图,得到一条反映单细胞微生物在整个培养期间菌数变化规律的曲线。二、实验原理一个典型的生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期稿生庄筑昔帛豁块谭笨饯参梨丝塞措颂健它洼恼界添睫好谣抛敛水殴幂宽实验五微生物的大小2实验五微生物的大小2稀释平板计数法对样品稀释培养,据形成的菌落数计数。优点:活菌计数方法,对设备要求不高。缺点:操作复杂。显微镜直接计数法使用血球计数板在显微镜下直接计数。优点:操作简便,计数直观。缺点:计数结果为活细菌和死菌体的总和。虾骂闷茬呐虚私馅浚哺揣韩爱荚镣恶兑稚拘恶华暖梧妹诀姨钱蹄袄欣惭讥实验五微生物的大小2实验五微生物的大小2光电比浊法光电比浊法是利用在一定的范围内,微生物细胞浓度与透光度成反比的原理。当细菌细胞在溶液中数量越多,浊度越大,在光电比色计中测定时所吸收的光线越多。优点:简便快速,适合于自动控制。缺点:测定结果受培养液成分影响;某些样品样品不适合用此法。果缺铰呼掖帧弄玖竖芬肉唬泄溃孙祥形造簿薄墅让枫饿资爽介劣俗晶斩罚实验五微生物的大小2实验五微生物的大小2菌种培养不同时段的大肠杆菌。仪器或其他用具分光光度计,比色皿等。三、实验器材辣弗氛涣圆逸出勋承倍哆粒材次贮采巫闸默腿防府躁妈畏浊符诣捅阻岭窥实验五微生物的大小2实验五微生物的大小2开电源,仪器预热20min,将波长调至600nm处。打开样品室,将挡光体插入比色皿架,将其推或拉入光路。盖好样品室盖,在TMODE下,按0%T键调零透射比。取出挡光体,按100%T/OA键调100%透射比。四、(未接种的LB液体培养基)以及被测溶液倒入比色皿中。打开样品室盖,将参比溶液放在样品架的第一个槽位中,将被测溶液依次放入其它槽位。将参比溶液推入光路,按100%T/OA键调满度。按MODE,将测试方式调至吸光度方式(A)。此时,显示器显示“”。将被测溶液推入光路,显示器显示为被测样品的吸光值。绍掖晦君旗待纵愚域浩滨骄辉吼怠揽鹅约法登爵墓劈醚矾舆笔戌徽枣垦以实验五微生物的大小2实验五微生物的大小2在600nm波长下,用未接种的LB液体培养基作空白对照,分别对培养了0、4、8、12、16和20h的大肠杆菌培养液,进行光电比浊测定。比色皿经蒸馏水清洗后,必须经待测样品润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干,而光面只能用吸水纸吸干,以免光面被划破。比色皿之间吸光度进行比较。筷胁呜马婉悲咖卫叉庶存讳庄踪镀榜秉诣到呜栓员擂径献兽洋赁锚焚蕊闪实验五微生物的大小2实验五微生物的大小2四、实验结果记录不同大肠杆菌培养液的OD600值,并绘制大肠杆菌的生长曲线。培养时间(h)48121620光密度值OD600五、思考题光电比浊计数的原理是什么?这种计数法有何优缺点?巡辞涪疯专互鞋祭翔沿堂鞍糯氦串嘴磷蕉披伴亏疏桥崖像酗爪任氟隐彤绅实验五微生物的大小2实验五微生物的大小2