凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒.doc

NurfürdenpersönlichenfürStudien,Forschung,(通用)(BIOTIN标记POD法,适用于细胞、组织样本)使用说明书一、TUNEL制品说明凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况,其原理是生物素(biotin)标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdTEnzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘-OH末端,并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)特异结合,在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺(DAB)的存在下,产生很强的颜色反应(呈深棕色),特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)的凋亡原位检测。本试剂盒特点●操作简便:使用Ready-to-Use型试剂,并配有ProteinaseK和DAB。●高灵敏度:可以单一检出初期的凋亡细胞。●高特异性:能特异性染色凋亡细胞。●快速操作:整体操作约需3小时。●用途广泛:可应用于组织切片、细胞样本等。●方便观察:使用光学显微镜观察实验结果。●高正确性:有阳性对照片的制备方法,,提前准备好相关试剂。,使用前请离心集液。、降低试剂的损耗,建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。,再分别滴加于各样本片上,避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。,请使用硅烷(Silane)处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。-20℃的70%乙醇中放置30分钟或至过夜,以改善细胞的渗透性。,不要直接加在细胞样本上,以防止细胞样本的脱落。,以5分钟清洗3次为标准。,使用前加入PBS配制成20×DAB(10mg/ml)后,按说明书显色使用。二、TUNEL试剂盒组分组份Cat:KGA702 20assaysCat:KGA70350assaysCat:-20℃Biotin-11-dUTP20μL50μL100μL-20℃TdTEnzyme80μL200μL400μL-20℃50×ProteinaseK40μL100μL200μL-20℃Streptavidin-HRP10μL25μL50μL4℃避光DAB2mg5mg10mg-20℃试剂盒以外自备仪器和试剂光学显微镜、37℃孵箱、微量移液器、染色湿盒、盖玻片、载玻片、染色缸。二甲苯、多聚甲醛、PBS、H2O2、TritonX-100、柠檬酸钠、复染染液:苏木素或甲基绿等。三、操作流程概览细胞涂片、贴壁细胞爬片等细胞样本固定样本通透性的促进TdT酶的作用下Biotin-dUTP与样本DNAD的标记反应加入Strep