酶活性的测定教育课件.ppt

二、材料和设备1、材料:马铃薯块茎2、仪器设备:751型分光光度计、离心机、研钵、25ml容量瓶、量筒、试管、吸量管。3、试剂:, (), 2%H2O2, , 20%三氯乙酸溶液三、实验步骤1、,切碎,放入研钵中。加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆。将匀浆液全部转入离心管中,于3000g水中离心10min,上清液转入25ml容量瓶中。沉淀用5ml磷酸缓冲液再提取2次,上清液并入容量瓶中,定容至刻度,低温下保存备用。2、过氧化物酶活性的测定酶活性测定的反应体系包括:、%H2O2、。以在沸水中加热5min的酶液为对照,做二组重复实验。反应体系加入酶液后,立即于37℃水浴中保温15min,然后迅速转入冰浴中,%三氯乙酸终止反应。然后,过滤(或5000g离心10min),滤液适当稀释,用751型分光光度计在470nm波长下测定反应体系的吸光度。CAT过氧化氢酶活性测定方法过氧化氢酶(HydrogenPeroxidase)又名触酶(Catalase,CAT),是一类以铁卟琳为辅基的结合酶,由4个亚基组成,分子量为240000。存在于动植物组织与细胞中的氧化还原酶类,它专一性地将细胞代谢产生的过氧化氢分解成H2O和02,避免了H202在体内积累,从而可维持体内正常的活性氧水平。:被用于食品包装,防止食物被氧化。在纺织工业中,被用于除去纺织物上的过氧化氢,以保证成品是不含过氧化物的。它还被用在隐形眼镜的清洁上:眼镜在含有过氧化氢的清洁剂中浸泡后,使用前再用过氧化氢酶除去残留的过氧化氢。近年来,过氧化氢酶开始使用在美容业中。一些面部护理中加入了该酶和过氧化氢,目的是增加表皮上层的细胞氧量。植物细胞中的过氧化物酶体参与了光呼吸(利用氧气并生成二氧化碳)和共生性氮固定(将氮气(N2)解离为活性氮原子)。细胞被病原体感染时,过氧化氢可以被用作一种有效的抗微生物试剂。其活性也与粮食品质之间有一定的相关性,是一项衡量谷物品质的重要指标。过氧化氢酶的测定:化学测定法:高锰酸钾滴定法,碘量法。光度法:紫外分光光度法,荧光分析法,化学发光法。电化学法:极谱氧电极法,电流测定法,电泳一染色法。放射化学测定法。简易气量测定法。高锰酸钾滴定法:过氧化氢酶(CAT)属于血红蛋白酶,含有铁,它能催化过氧化氢分解为水和分子氧,在此过程中起传递电子的作用,过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。据此,可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量(反应过量)的H2O2溶液,经酶促反应后,用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的H2O2。即可求出消耗的H2O2的量。酶活性用每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示:酶活(mgH2O2/gFW·min)=式中A—对照KMnO4滴定毫升数;B—酶反应后KMnO4滴定毫升数;VT—酶液总量(ml);V1—反应所用酶液量(ml);W—样品鲜重(g);—。