生物素定量测定试剂盒说明书.doc

1stEdition,revisedinMarch,2015(本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断!生物素(Biotin定量测定试剂盒使用说明书Biotinquantitativedetectionkit产品货号:EBD0325有效期:12个月使用前请仔细阅读说明书。如果有任何问题,请通过以下方式联系我们:全国免费电话400-660-4808销售部电话027-********技术部电话027-********电子邮箱(销售Perry@电子邮箱(技术******@QQ客服1037150941网址供产品货号(见试剂盒标签,以便我们更高效地为您服务。生物素(Biotin定量测定试剂盒使用说明书产品货号:EBD0325(本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!声明:尊敬的客户,感谢您选用本公司的产品。本产品适用于体外定量检测血清、血浆、乳制品或其它相关生物液体中生物素浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分!如有疑问,请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。试剂盒组成:特别说明:*:[96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整#:一周内使用可存于4℃,需长时间存放或多次使用建议存于-20℃.相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些,请在使用时量取而非直接倒出!检测原理:本试剂盒采用竞争法。用生物素包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的生物素与包被的生物素竞争辣根过氧化物酶标记的亲和素(Avidin-HRP上的结合位点,生物素与亲和素特异性结合而形成复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB,TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,生物素浓度与OD450值之间呈反比,通过绘制标准曲线计算出样品中生物素的浓度。试验所需自备物品:(,EP管及一次性吸头:-10μL,2-20μL,20-200μL,200-℃恒温箱,:,平衡至室温。(1:25。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超过50℃,使用时洗涤液应为室温。当日使用。:于10000×g离心1分钟,加入标准品&,旋紧管盖,静置10分钟,上下颠倒数次,待其充分溶解后,轻轻混匀(浓度为20ng/mL。然后根据需要进行倍比稀释(注:不要直接在反应孔中进行倍比稀释。建议配制成以下浓度:20、10、5、、、、、0ng/mL,标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制10ng/mL标准品:&样品稀释液的EP管中,混匀即可,其余浓度依此类推。-HRP工作液:实验前计算当次实验所需用量(以50μL/孔计,实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物稀释液稀释浓缩Avidin-HRP(1:100成工作浓度。当日使用。标准品稀释方法图例:(以500μL/管为例,也可根据实际用量来稀释,如200μL/::每孔加入洗涤液350μL,注入与吸出间隔60秒。:甩尽孔内液体,在洁净的吸水纸上拍干,每孔加洗涤液350μL,浸泡1-2分钟,吸去(不可触及板壁或甩掉酶标板内的液体,在厚的吸水纸上拍干。操作步骤:实验开始前,各试剂均应平衡至室温;试剂或样品配制时,均需充分混匀,并尽量避免起泡。:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液50μL,余孔分别加标准品或待测样品50μL,立即每孔加入配好的Avidin-HRP工作液50μL(在使用前15分钟内配制,注意不要有气泡,加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜,37℃孵育30分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,大约350μL/每孔,甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。(TMB90μL,酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右(根据实际显色情况酌情缩短或延长,但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时,即可终止。,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。(OD值。应提前打