用高效液相色谱法测定血清碘海醇浓度的方法.doc

用高效液相色谱法测定血清碘海醇浓度的方法本文从网络收集而来,上传到平台为了帮到更多的人,如果您需要使用本文档,请点击下载按钮下载本文档(有偿下载),另外祝您生活愉快,工作顺利,万事如意! 肾小球滤过率(glomerularfiltrationrate,GFR)是评价肾脏功能的最佳指标。以内源性标志物为基础的eGFR(estimatedglomerularfiltrationrate,eGFR)预测公式为临床广泛应用。然而,国内儿童eGFR公式多是采用国外公式,其在中国儿童中的适用性并未得到广泛认可。碘海醇血浆清除率因操作方法简便、无放射性,与菊粉及放射性标志物(如99mTc-DTPA和51Cr-EDTA等)清除率具有较好的一致性,在国外被用来评估包括儿童在内的广泛人群的GFR。而且,其用于评估肾功能时所用剂量约为5mL,为常规造影剂量的1/20,安全性非常好。但是,国内关于碘海醇浓度测定方法的研究较少,使得碘海醇清除率尚未推广。本研究拟建立测定血清碘海醇浓度的HPLC法,并探索碘海醇清除率在慢性肾脏病(chronickidneydisease,CKD)儿童肾功能评价方面的可行性。 1材料与方法 33例CKD患儿中,男13例,女20例,平均年龄(±)岁,身高(±)cm,体质量(±)kg,血清肌酐为(±)μmol/L(酶法)。33例患儿以99mTc-DTPA血浆清除率为CKD分期标准分为:1期13例,2期15例,3期5例。该研究通过北京协和医院伦理委员会的审查。所有患儿接受检查前均由监护人签署知情同意书。 :碘海醇标准品(98%,Sigma公司)。内标(internalstandard,IS):碘海醇杂质B(100%,中国药品生物制品检定所)。 :色谱柱(日本岛津CLC-ODS,150mm×,5μm),流动相为乙腈与超纯水3∶97体积配制(~),检测波长(λ)254nm,柱温40℃,。 :1)碘海醇标准母液(10g/L)。2)内标为碘海醇杂质B溶液(1g/L)。3)血清标准曲线(10~1000mg/L,n=7):将碘海醇标准母液分别以空白血清稀释,配制血清标准曲线系列,浓度分别为1000、500、250、100、50、25和10mg/L。4)血清质控样本(低、中和高浓度):将碘海醇标准母液以空白血清稀释成20、200和750mg/L质控样本。用于方法学批间(n=6)、批内(n=10)及回收率变异性考察。 :取100μL样本(标准曲线样本或质控样本)加入20μL内标液,再加入100μL高氯酸(5%),沉淀离心后取10μL上清液进样分析。 :包括线性关系考察、精密度、真实性考察及药物干扰性试验。 :纳入2013年4月至2014年2月在北京协和医院和首都儿童研究所就诊的CKD儿童33例。排除如下情况:急性肾损伤,严重浮肿,明确的全身性感染,恶性肿瘤病史,近期重大手术病史及无法配合检查者。所有患儿采用最新Schwartz公式估算eGFR,