以花药为受体的小麦转基因技术体系的构建.doc

以花药为受体的小麦转基因技术体系的构建山东农业科学2014,46(1):1~5,18ShandongAgriculturalSciences以花药为受体的小麦转基因技术体系的构建倡高洁,王姣,张淑娟,郭栋,李玉莲,宋国琦,陈雪燕,李根英(山东省农业科学院作物研究所/农业部黄淮北部小麦生物学与遗传育种重点实验室/小麦玉米国家工程实验室,山东济南250100)摘要:为了在转化当代获得纯合的转基因株系,本试验对以小麦花药为受体的转基因方法进行了系统研究。结果表明,、金粉浓度100μg/枪、轰击距离6cm、轰击压力1300psi为基因枪转化小麦花药的最佳参数组合。用含有5%%秋水仙碱溶液处理单倍体植株4h,染色体加倍效率最高,达到100%;用含1%DMSO的溶液处理12h加倍效率最低,%。PCR结果显示所有T代阳性植0株在T代都无分离,说明该方法得到的转基因株系在T代即为纯合系。本研究成功建立了以花药为受体的10小麦转基因技术体系,为小麦遗传改良提供了一种新的方法。关键词:小麦;转基因;受体;花药;染色体加倍中图分类号:Q785文献标识号:A文章编号:1001-4942(2014)01-0001-06倡GaoJie,WangJiao,ZhangShujuan,GuoDong,LiYulian,SongGuoqi,ChenXueyan,LiGenying(,/&&,/&,250100,)Toobtainhomozygoustransgenicwheatwithinonegeneration,-μmparticlesize,100μgpershot,6-cmbombardmentdistanceand1300-(100%)%colchicinesolutioncontaining5%DMSOfor4hours,andthatcontaining1%DMSOhadthelowestdoublingefficiency(%).SpecificPCRamplificationshowedthatallT0positiveplantshadnosegregationinTgeneration,,;Transgenosis;Receptor;Anther;Chromosomedoubling小麦是重要的粮食作物之一,小麦生产的可难。转基因技术为利用异源基因改良小麦的抗逆持续性对于保障粮食安全至关重要。然而,由于性、实现种质资源创新的新突破提供了新的机[1]缺少高抗生物或非生物逆境的小麦种质资源,在遇。有限的土地资源上进一步提高小麦产量异常艰愈伤组织诱导和再生是小麦转基因的关键步收稿日期:2013-12-01基金项目:山东省良种工程(2012);山东省科技发展计划(2013);国家转基因重大专项(2013ZX08002-004);山东省博士后创新项目专项资金(201203024)作者简介:高洁(1985-),女,研究实习员,从事小麦分子育种研究。E-mail:******@:李根英(1968-),女,研究员,从事小麦分子育种研究。E-mail:******@2山东农业科学第46卷骤,迄今为止,已成功用于小麦遗传转化的外植体min,制成终浓度为10μg/μl的金粉贮藏液。将[2,3][4][5,6]有幼胚、幼穗、花药诱导后的胚状体、小金粉贮藏液充分涡旋,[7][8]孢子、成熟胚等。这些外植体中,除了花药ml离心管中,14000r/min离心30s,弃上清;加诱导后的胚状体和小孢子为单倍体外,其余皆是入50μl灭菌水悬浮金粉,在振荡器上边轻微振二倍体。由于小麦基因组庞大,含有42条染色荡边加入1μg/μl的质粒10μl,/L的