缓冲液、常用试剂、培养基的配制方法.doc

实验常用试剂、缓冲液、培养基的配制方法1、1MTris-HCl           □组份浓度1MTris-HCl(,,)   □配制量1L□。,充分搅拌溶解。。pH值                     浓HCl                                                                         。 ,室温保存。                           注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,。 2、-HCl    □-HCl()           □配制量1L□。,充分搅拌溶解。。。,室温保存。 注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,。 3、10×TEBuffer       □组份浓度100mMTris-HCl,10mMEDTA(,,) □配制量1L□,置于1L烧杯中。1MTris-HClBuffer(,,)100mL500mMEDTA(),均匀混合。,高温高压灭菌。。4、3M醋酸钠     □组份浓度3M醋酸钠()          □配制量100mL□?3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。。。,室温保存。5、PBSBuffer         □组份浓度137mMNaCl,,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4□配制量1L□,置于1L烧杯中。NaCl                   8gKCl                                           ,充分搅拌溶解。,然后加入去离子水将溶液定容至1L。 ,室温保存。注意:上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,。6、10M醋酸铵        □组份浓度10M醋酸铵□配制量100mL□~200mL烧杯中,加入约30mL的去离子水搅拌溶解。。。。 注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。7、Tris-HCl平衡苯酚   □:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。  :苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。 :因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,,苯酚平衡操作方法如下: ①液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。 ②加入羟基喹啉(8-Quinolinol)%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 ③加入等体积的1MTris-HCl(),使用磁力搅拌器搅拌15分钟