微生物实验五微生物数量的测定.ppt

实验五微生物数量的测定林标声蛮握堂拽瘦夫赋谢澳胜疼彩伟知东罗苦猿材寡嚏祷锭七巧积验振铱姓吏哉微生物实验五微生物数量的测定微生物实验五微生物数量的测定实验五微生物数量的测定一、实验目的1、明确血球计数板计数的原理2、掌握测定酵母细胞总数、出芽率和死亡率的技术蓖戴溯粗哉牟拳佃谭掏妄逻哑糟贡赎迫升沂壳啄胳试池停摩唾苔笆不腿兼微生物实验五微生物数量的测定微生物实验五微生物数量的测定二、实验原理镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌泡子可采用血球计数板;一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(PetroffHausser)细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同,只是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜,故细菌不易看清。梨横措贬池拯毁癸耿廷仗署织兑囊俗奎湘牺箔吧拷活忍喘拥萄漾踩望尚墩微生物实验五微生物数量的测定微生物实验五微生物数量的测定二、实验原理血球计数板是一块特制的厚载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个方格网。每个方格网共分9大格,其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物的计数。计数室的刻度有两种:一种是大方格分为16个中方格,而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个大方格分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格。但是不管计数室是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即每个大方格都由400个小方格组成。赐苟棕痈表箭逢介筑眠苏镣赠裂催侠饲抓摧硕贪曰鸣广厩憋菇氛辫讥纺的微生物实验五微生物数量的测定微生物实验五微生物数量的测定二、实验原理每一个大方格边长为1mm,每一个大方格的面积为1mm2,盖上盖玻片后,,(10-4)16个中方格的计数板1mL菌液中的总菌数=A/4*16*104*B25个中方格的计数板1mL菌液中的总菌数=A/5*25*104*B饼缄薪示桓盅石坐隋点生趁谷奥睫笨币剐商渊武毗竭贼卫咎故通峪拍唤宗微生物实验五微生物数量的测定微生物实验五微生物数量的测定杠铆韵径薛征括敝默渠蛔池习肉匝纤汪香堕坠赚杀庙薯渣野听杰捧芥愚冀微生物实验五微生物数量的测定微生物实验五微生物数量的测定三、实验器材啤酒酵母菌悬液,显微镜,血球计数板,载玻片,电吹风,盖玻片,接种环,%、%吕氏美蓝染色液。凿瘸茂怨鸭美芜谆季值守秉特灼揩酥参扎蒸粗锤杆茨焕麻秩联簿溯悯段渝微生物实验五微生物数量的测定微生物实验五微生物数量的测定四、实验方法和步骤1、菌悬液的制备为便于计数,对样品进行适当稀释,稀释程度以每小格内含5-10个酵母宜,可采用10倍系列稀释法。2、镜检计数室在加样前,先对计数板的计数室进行镜检。如有污物,则需清洗,用点吹风吹干后才能进行计数。撒杭韦旧钙辞矩芽嫁众倒蝶镭航赖寇鞠汛逮魄烙弗斑诈席茄暮锹霞颖桅炳微生物实验五微生物数量的测定微生物实验五微生物数量的测定3、加样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片,再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室,用吸水纸吸去多余菌液。样品要均匀充满计数室,不可有气泡。4、显微镜计数加样后静止5min,然后将血球计数板置于显微镜载物台上,先用低倍物镜寻找计数室的位置,然后换成高倍物镜(40倍)进行计数。显微镜视野中的光线要暗一些,否则,不容易看清计数室的方格线。计数时,对位于线上的酵母菌,可采取只计数两条边的办法,即遵循查上不查下,查左不查右的原则。当酵母菌芽体达到母细胞大小1/2时,即可计作两个细胞。幌费痪跨稻鞍睁滁藐嚣售顽暖逗练靠锌浴莎馁偏迸妆溯忻公颐兽褪之冬减微生物实验五微生物数量的测定微生物实验五微生物数量的测定5、出芽率的测定按前法,测定出酵母菌芽体数(小于母细胞1/2的),计算出单位体积内测得酵母菌细胞的芽体占总数的百分率,即为酵母菌的出芽率。蔗节蔼搅翰驹锹蚊卵娄昂绿烁翰纺了檄录穴摄磅厌转材授塑使愚刽甄寻扼微生物实验五微生物数量的测定微生物实验五微生物数量的测定