白眉蝮蛇蛇毒L 氨基酸氧化酶的纯化与表征.doc

,413白眉蝮蛇蛇毒L2氨基酸氧化酶的纯化与表征孙明忠丁兰赵大庆倪嘉缵()中国科学院长春应用化学研究所稀土化学与物理开放实验室,长春,130022()摘要用离子交换和凝胶过滤层析技术从长白山白眉蝮蛇蛇毒Agkistrodonblomhoffiiussurensis(())中分离得到了L2氨基酸氧化酶L2aminoacidoxidase,经SDS2聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS2PAGE()和基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱MALDI2TOF2MS鉴定,发现L2氨基酸氧化酶由两个不相等的亚基组成,一个亚基的分子量约为36000,,其反应的适宜pH值为4515和89,,L2氨基酸氧化酶,纯化,()L2氨基酸氧化酶L2氨基酸?,它能专一21,2α性氧化L2氨基酸,,另外L2氨基酸氧化酶也被用来由3,52二碘酪氨酸生产甲状腺素,,国内学者对该酶研究较少,,该酶由两个不相等亚基组成,与其它来源的L2氨基酸氧化酶有较大差异,()()白眉蝮蛇蛇毒粉末吉林柳河长青制药厂为金黄色;DEAE2SephadexA250A250,’’()SephadexG275G275,丙烯酰胺,甲叉双丙烯酰胺,N,N,N,N2四甲基乙基二胺为瑞典()Pharmacia公司产品;L2亮氨酸为上海生物化学研究所产品;,Phastsystem多功能快速水平电泳为瑞典Pharmacia公司产品;冻干系统Labconco产品;基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪LDI21700为LinearScien2();UV2922分光光度计及高速离心机CT2124为意大利Kontron公司产品;SL22数控层析冷柜为军事医学科学院研制,,对文献6方法加以改进.()反应体系组成:012mL酶液+110mLL2亮氨酸0105mol/L,总体积112mL,37?保温收稿日期:::孙明忠,男,27岁,,加27%三氯乙酸1mL终止反应,以6000r/min离心10min,取1mL反应液加1mL蒸馏水和2mL奈氏试剂应用液,430nm比色,,,,测定各洗脱峰的L2氨基酸氧化酶活力,:将L2氨基酸氧化酶配成浓度为112mg/mL溶液,按照文献8,9方法做电泳,浓缩胶5%,分离胶浓度12%,交联度C为3%,电泳完毕用考马斯亮蓝R250在50?染色4h,再用10%:用二次蒸馏水将样品配成0150mg/mL溶液,以Sa为基质,(),4?时以6000r/min离心20min,,()图1峰6,