苯丙氨酸解氨酶.doc

’,.墓瑟盏盂一一九九=年十:月苯丙氨酸解氨酶赵健身杨顺楷?———————一——-———一(中国科学院成都生物研究所成都610015)Q摘要苯丙氨酸辑氨酶由四十亚基组成,,,,,有六十内古于,编码75kD=,有一十内古子,编码苯丙氨酸解氨酶(PhenylalanineAmmonia-lyase,PAL,)存在于植物及某些真菌中,它催化0苯丙氨酸(L-Phe)~氧化性脱氨生成反式肉桂酸(cA).CA是植物一太类生物活性及功能显着的苯丙烷类次生物质如黄酮,香豆素,木质素及某些酚类的生物合成起始物,,主要通过窟动PAL核基因转录从头合成该酶产生对抗性保护反应或发生分化(木质化及着色等).—,铵(Nnt)因限制细胞吸收L-()介质及高浓度NHt及NHj存在下催化氨化CA这一途径是目前商业化制备L-—,该酶已应用于L-,人们就它的生物化学,生理代谢的分子生物学及工业微生物学进行了广泛的研究,,酶的组成与结构,,主要基本性质,结构与催化化学机制,亚基一级结构及核基因克隆与结构研究进展进行综述收蕾日期,1992年7月24日\..一号弋…,\coo一—i\=/…?rH圈1PAL酶匣应(蘸健身)苯丙氨酸解氨酶酶化学与生物化学一,,材料中古量较低,稳定性差,-ph~生成CA的量而定,主要方法有气相,,,采用降低溶液pH值,热处理(60~C),添加丙酮,硫酸鱼精蛋白,,——-纤维素,DEAE-,单步酶活可提高3一lO倍,成为从微生物及某些植物材料分离纯化PAL的主要手段..—phc或超抑制剂L氨氧基一苯丙酸(L-AOPP)()活化的载体上所得亲和柱,分离效果并不十分理想,最近报道的纯化倍数仅2—,-AOPP柱洗脱前可充分洗涤除去杂质(如多糖)制备抗原性均一的PAL制品作为探针].该法的缺点是洗脱较难,以~AOPP长时间洗脱处理仍在柱上保留70%以上,,Br活化的载体上偶联抗PAL抗体(IsG)的免疫亲和层析法的报道”].,活力可提高2—6倍,介质包括:Sephadex0-200,Sepharose6B,SepkacrylS-—Sepharose醢水色谱柱从柑桔幼果中分离PALrfl,一步可得到仅含少量杂蛋白的髓,操作时间短而且收率高(,50).羟基磷灰石吸附色谱早期应用较多采用两次聚焦色谱(—,—)可将莱豆PAL分成几种Mf相同,..二PAL结构,,其分