苯丙氨酸解氨酶检测试剂盒(苯丙氨酸比色法).doc

苯丙氨酸解氨酶(PAL)检测试剂盒(苯丙氨酸比色法)简介:苯丙氨酸解氨酶( L-phenylalanineammonia-lyase,PAL)是催化直接脱掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质,,推测其分子量约为,这是一个可把苯丙氨酸用于酚类化合物合成的酶。在组织中的活性可随外界因素而发生显著变化,用光照、病伤害、植物激素处理等会使活性显著增加。在多数情况下,在组织中活性增加时,酶发生失活作用,这时组织中具有活性酶的量很快就会减少,据认为这种失活是与类蛋白质物质作用有关。测定细胞木质素合成途径中间代谢物及关键酶活性,可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理,为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。Leagene苯丙氨酸解氨酶(PAL)检测试剂盒(苯丙氨酸比色法)检测原理是以苯丙氨酸作为底物,在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法,于分光光度计检测吸光度,以吸光度变化所需酶量进行计算。该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的苯丙氨酸解氨酶活性,尤其适用于检测水果中苯丙氨酸解氨酶活性。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。组成:编号名称TE040350TStorage试剂(A):PALLysisbuffer250ml4℃避光试剂(B):PALAssaybuffer30ml4℃避光试剂(C):PAL终止液5mlRT使用说明书1份   自备材料:1、蒸馏水2、研钵或匀浆器3、离心管或试管4、低温离心机5、水浴锅或恒温箱6、比色杯7、分光光度计操作步骤(仅供参考):1、准备样品:植物样品:取植物组织或水果中层果肉,加入PALLysisbuffer,冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆,离心,留取上清液,冻存,用于苯丙氨酸解氨酶的检测。血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,冻存,用于苯丙氨酸解氨酶的检测。细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,离心,取上清液,冻存,用于苯丙氨酸解氨酶的检测。高活性样品:如果样品中含有较高活性的苯丙氨酸解氨酶,可以使用蒸馏水或PALLysisbuffer稀释进行恰当的稀释。2、PAL加样:按照下表设置对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的PAL活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行管,求平均值。加入物(ml)-   3、PAL检测:立即以分光光度计,比色杯光径,以对照管为对照,测定处测定管的吸光度(A测定0)。准确孵育后,立即加入PAL终止液终止反应(备选方案),以分光光度计,比色杯光径,以对照管为对照,测定处测定管的吸光度(A测定1)。注意:加入PAL终止液终止反应不是必须步骤,可准确孵育后直接以分光光度计,比色杯光径,以对照管为对照,测定测定管的吸光度(A测定1)。计算:PAL活性