尿中苯乙醛酸、苯巯基尿酸检测方法.doc

尿中苯乙醛酸、苯巯基尿酸检测方法摘要本实验建立并完善了超高效液相色谱-离子阱质谱法检测尿中苯乙醛酸和苯巯基尿酸的方法,采用乙酸乙酯液液萃取净化尿液,苯乙醛酸、苯巯基尿酸的回收率为:%%;检出限分别为:/L。关键词:苯乙醛酸苯巯基尿酸液液萃取高效液相色谱离子阱质谱苯、甲苯、苯乙烯等芳香族有机化合物,广泛应用于工业生产、医药合成等领域。该类物质通过呼吸道吸入或经皮肤接触进入人体后会对神经、呼吸、生殖、血液等系统产生损害,属于工作场所中常见的有害物质。这些有害物质在体内可通过不同方式进行代谢,并可在[1]尿液中检出其相应的代谢产物。苯乙烯进入人体后少量以原型自呼出气和尿中排出,绝大多数以代谢产物苯乙醛酸和苯乙醇酸自尿中排出。尿中苯乙醛酸和苯乙醇酸可以反映近几天的苯乙烯接触量及负荷,美国官方工业卫生家协会(ACGIH)及欧共体已将其作为苯乙烯的生物接触指标并制定了相[2]应的生物接触限值。目前,国内外通常使用高效液相色谱法测定尿中苯乙醛酸和苯乙醇酸。尿中苯巯基尿酸(SPMA)被认为是一种能够在低暴露水平下评价苯暴露水平特异而敏感的生物标记物,在危险度评价中具有潜在而重要的意义。由于吸入苯转化为SPMA的转化率很低,因此定量分析SPMA要求高敏感以及高特异性的检测技术。目前国内外报道中,SPMA可通过气相色谱(GC),带有紫外或荧光检测1器的高效液相色谱(HPLC),气相色谱-质谱联用(GC-MS),液相色谱串联质谱(LC-MS/MS),或酶联免疫吸附测定(ELISA)等方法进行检测[5]。目前,尿代谢产物的检测方法主要有分光光度法、气相色谱法(GC)、气相色谱质谱法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)等。其中,光度法简便易行,但灵敏度较低,干扰严重;GC法通常需衍生化处理,操作繁琐,且衍生条件不易精确控制;HPLC法是测定尿代谢产物比较适合的方法,但研究的大多为单一或较少几种代谢产物,对于苯巯基尿酸含量很低的代谢产物,存在灵敏度不高的问题。本实验利用乙酸乙酯液液萃取对尿液进行处理,4-溴-DL-扁桃酸作为内标,利用高分离度、高选择性的超高效液相-离子阱质谱,建立了尿液中苯乙醛酸,苯巯基尿酸同时检测的方法。(美国);AB离子阱串联质谱(美国);WatersBEHC柱(.×50mm,美国);18Heidolph震荡仪(德国);北利DT5-6C离心机(中国);Organomation氮吹仪(美国);WatersHLB(500mg,6ml)固相萃取小柱(美国);苯乙醛酸、苯巯基尿酸、4-溴-DL-扁桃酸均为分析纯,购自Sigma公司;乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇均为色谱纯,购自Dima公司;盐酸、氢氧化钠、甲酸铵、氨水均为分析纯。(1mol/L):准确称取4g氢氧化钠于塑料烧杯中,2加入96ml水溶解,混匀后转移到塑料试剂瓶中备用。(1mol/L):,加水到刻度,混匀后备用。(1mol/L):,用水溶解并定容至刻度,混匀后冷藏备用。:用量筒量取甲