实验诱导细胞融合聚乙二醇法.ppt

实验诱导细胞融合聚乙二醇法一、实验目的了解细胞融合的原理,初步掌握用PEG诱导细胞融合的方法。二、实验原理聚乙二醇(PEG)结构为:CH2(OH)-(CH20CH2)n-CH2OH;相对分子质量在2000-6000均可用作细胞融合剂。普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构,使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组,由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用,从而使细胞发生融合。细胞融合率是指在显微镜的一个视野内,已发生融合的细胞其细胞核总数与该视野内所有细胞(包括已融合的细胞)的细胞核总数之比,通常以百分比表示。三、实验材料与用品材料:鸡血红细胞试剂:(1)Alsver液:(2)%生理盐水:(3)GKN液:(4)Ringer溶液:(5)Hanks液:(6)50%PEG混合液(7)%次甲基蓝仪器:离心机,水浴箱,电炉,量筒,离心管,注射器,试管,移液管,烧杯,吸管,载玻片,盖玻片,显微镜四、:用注射器吸入1mLAlsver液后从鸡翼下静脉取鸡血2mL,注入刻度离心管内,按照3:1(V/V)加入6mLAlsver液混匀,放入4℃冰箱内可保存3~4天。,移人7mL离心管,%生理盐水混匀;2000r/min离心5min。(用吸管吸去),%生理盐水至5mL,混匀后2000r/min离心5min。,再离心洗涤1次。,加入适量的GKN液溶液,按压积红细胞体积配成10%的红细胞悬液。50%PEG混合液配置:称取少许PEG放人刻度离心管内,在沸水浴中加热,使其溶化,待冷却至50℃时,加入预热至50℃的等体积的GKN液,混匀。注意使用前配制。,~