诱导细胞融合——聚乙二醇法.doc

诱导细胞融合——聚乙二醇法    细胞融合,即在自然条件下或利用人工法(生物的、物理的、化学的),使两个或两个以上的细胞合并成一个具有双核或多核细胞的过程。人工诱导细胞融合始于20世纪50年代,并迅速成为一门新兴技术。由于不仅同种细胞可以融合,种间远缘细胞也能融合,甚至于动植细胞也能合二为一,因此细胞融合技术目前较广泛应用于细胞生物学、遗传学和医学研究等各个领域,并且取得显著的成绩。    聚乙二醇(PEG)结构为:HOH2C(CH20CH2)nCH2OH,相对分子质量在200-6000均可用作细胞融合剂。普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构,使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组,由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用,从而使细胞发生融合:细胞融合率是指在显微镜的一个视野内,已发生融合的细胞核总数与该视野内所有细胞(包括已融合的细胞)的细胞核总数之比,通常以百分比表示。该方法的优点是:用法简单,容易获得融合体,融合效果好。蟾蜍血红细胞\鸡血红细胞:[实验步骤]:(1)Alsver液:,,,加重蒸水至100mL即可。(2)%生理盐水:。(3)GKN液:氯化钠8g,,,,葡萄糖2g,,溶于1000mL重蒸水中。(4)Ringer溶液:,,(恒温动物9g)溶于1000mL蒸馏水中。(5)50%PEG混合液:称取少许PEG(Mw4000)放人刻度离心管内,在沸水浴中加热,使其溶化,待冷却至50C时,加入预热至50℃;的等体积的GKN液,混匀。注意使用前配制。:显微镜,离心机,水浴箱,电炉,量筒,离心管,注射器,试管,移液管,烧杯,吸管,载玻片,盖玻片,显微镜。[实验步骤]:(1)蟾蜍血红细胞悬液的制备:用注射器吸人1mLAlsver液后,从蟾蜍主动脉弓取血1mL放入刻度试管中,再加入2mLAlsver液(封口后可4℃冰箱内可保存1周);放入刻度离心管内,按照3:1(V/V)加入6mLAlsver液混匀,放入4℃冰箱内可保存3--4天。(2)鸡血红细胞悬液的制备:用注射器吸入1m