人源化抗血小板膜糖蛋白GPIb噬菌体抗体的研制及活性研究.doc


人源化抗血小板膜糖蛋白 GPIb 噬菌体抗体
的研制及活性研究#
冀学斌,李秋环,于玲家,侯明*
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(山东大学齐鲁医院血液科,济南 250012)
摘要:目的用噬菌体抗体库技术研究抑制血小板粘附功能的人源化抗血小板膜糖蛋白(GP)
Ib 单链噬菌体抗体。方法用 MAIPA 技术和血小板粘附试验从 ITP 患者血浆中筛选出抑制
血小板粘附的抗血小板 GPIb 自身抗体。提取 mRNA,用 RT-PCR 扩增出人免疫球蛋白的重
链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片断,用 DNA linker 将 VH 和 VL 连接成单链抗
体(ScFv)基因片断。用限制性内切酶 SfiⅠ/NotⅠ酶切 ScFv 后克隆到噬菌体载体 pHEN2,
转化大肠杆菌 TG1。用辅助噬菌体 M13 K07 援救转化后的 TG1,产生 ScFv 噬菌体抗体片
段。用抗原吸附法经过 5 轮吸附-洗脱-富集,得到抗 GPIb ScFv 噬菌体抗体片段,纯化后
研究其对血小板粘附功能的影响。结果 28 例慢性 ITP 患者中 5 例(%)血浆中抗 GPIb
自身抗体阳性,1 例明显抑制血小板粘附功能。扩增出 380~400 bp 大小的 VH 和 VL 基因,
用连接肽(Gly4Ser)3 成功地连接成约 800 bp 大小的 ScFv 片断。ScFv 克隆到 pHEN2 并转化
大肠杆菌 TG1 后,形成 ×10*7 个克隆。用辅助噬菌体 M13K07 援救 TG1 后产生的噬菌
体抗体滴度为 ×10*10cfu/ml。亲和层析后得到的纯化抗体,初步研究证实可抑制血小
板粘附功能。结论利用噬菌体抗体库技术表达的人源化抗血小板 GPIb 噬菌体抗体 ScFv 片
断可抑制血小板粘附功能。
关键词:内科学;特发性血小板减少性紫癜;抗 GPIb 自身抗体;粘附;人源化单链抗体;
噬菌体抗体库技术
中图分类号:R558+.2
Study of a humanized anti-platelet GPIb single chain Fv
phage antibody
JI Xuebin, LI Qiuhuan, YU Lingjia, HOU Ming
(the Hematology department of QiLu Hospital, Shandong University, Jinan 250012)
Abstract: Objective To study the anti-platelet GPIb
single chain Fv phage antibodiy which can
inhibit the adhesion function of platelet by phage antibody library technology. Methods To
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screen out the ITP patients whose plasma contain anti-platelet GPIb autoantibody which can
inhibit the adhesion function of plate