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食品微生物检验第七章食品微生物检验学习本章的意义和内容:掌握光学显微镜的使用方法,掌握细菌染色标本的制作技术。掌握样品的采集和处理方法。掌握菌落总数的测定方法与步骤。掌握大肠菌群的测定方法与步骤。学会乳糖胆盐发酵管培养基的制备。掌握革兰氏染色方法。本章习题内容主要涉及:食品微生物检验的范围;食品微生物检验的指标;细菌染色的基本方法和步骤;常用染色方法及染色液;食品微生物学一般检验技术。一、食品微生物检验的意义食品微生物检验方法为食品监测必不可少的重要组成部分。(1)它是衡量食品卫生质量的重要指标之一,也是判定被检食品能否食用的科学依据之一。(2)通过食品微生物检验,可以判断食品加工环境及食品卫生环境,能够对食品被细菌污染的程度做出正确的评价,为各项卫生管理工作提供科学依据,提供传染病和人类、动物和食物中毒的防治措施。(3)食品微生物检验是以贯彻“预防为主”的卫生方针,可以有效地防止或者减少食物中毒人畜共患病的发生,保障人民的身体健康;同时,它对提高产品质量,避免经济损失,保证出口等方面具有政治上和经济上的重要意义。二、食品微生物检验的范围食品微生物检验的范围包括以下几点:(1)生产环境的检验:车间用水、空气、地面、墙壁等。(2)原辅料检验:包括食用动物、谷物、添加剂等一切原辅材料。(3)食品加工、储藏、销售诸环节的检验:包括食品从业人员的卫生状况检验、加工工具、运输车辆、包装材料的检验等。(4)食品的检验:重要的是对出厂食品、可疑食品及食物中毒食品的检验。三、食品微生物检验的指标我国卫生部颁布的食品微生物指标有菌落总数、大肠菌群和致病菌三项。(1)菌落总数菌落总数是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后所得1g或1mL检样中所含细菌菌落的总数。(2)大肠菌群大肠菌群是寄居于人及温血动物肠道内的肠居菌,它随着的大便排出体外。食品中如果大肠菌群数越多,说明食品受粪便污染的程度越大。(3)致病菌致病菌即能够引起人们发病的细菌。对不同的食品和不同的场合,应该选择一定的参考菌群进行检验。(4)霉菌及其毒素我国还没有制定出霉菌的具体指标,鉴于有很多霉菌能够产生毒素,引起疾病,故应该对产毒霉菌进行检验。(5)其它指标微生物指标还应包括病毒,肝炎病毒、猪瘟病毒、鸡新城疫病毒、马立克氏病毒、口蹄疫病毒,狂犬病病毒,猪水泡病毒等;另外,从食品检验的角度考虑,寄生虫也被很多学者列为微生物检验的指标。四、染色细菌标本检查法微生物中细菌、致病菌是很小的生物体,必须通过染色的方法,在显微镜下才能看得清楚,并且还可以通过染色的方法鉴别革兰氏染色特性,以及是否长有鞭毛、周毛、荚膜和芽孢等。1、染料细菌染色用的染料多为有色泽的有机酸或者有机碱,因为其溶解度有限,一般使用其盐类。可分为以下四类。(一)酸性染料染色离子带阴电,因此,又叫做阴离子染料。它能与带阳电的物质结合,使之着色。降低菌液的pH而使细菌带阳电时,就可用酸性染料染色。如伊红、刚果红等。(二)碱性染料染料离子带正电,也叫做阳离子染料。它能与带负电的物质结合。细菌一般带负电,所以细菌染色所用的染料,常用碱性染料,如美蓝、碱性复红等。一部分碱性染料,如碱性复红、美蓝等具有与氢结合的能力,结合后双键饱和,色基不再存在。此时,化合韧杖还原,成为无色的化合物,再经氧化即可显色。(三)复合染料碱性染料与酸性染料的结合物,叫做复合染料,或叫中性染料。例如wright染料中的伊红美蓝,Giemsa染料中的伊红天青等。(四)单纯染料被染杖柒物生成盐类。它的染色能力,视其能否溶于被染物而言。它们大多数属于偶氮化合物,具有脂溶性而不溶于水,如苏丹类(Sudans)染料。2、影响染色的因素不同细菌其细胞壁酌结构、细胞膜的通透性,膜孔的大小等有一定的羌别,。此外,培养基的组成、菌龄、染色液中电解质含虽和pH、温度、药物等,都可能影响细的染色情况。3、细菌染色的基本方法和步骤单染色法是用一种染料染色的方法。例如用美蓝或稀释击炭酸复红等,使各种细菌染成间—种颜色。故此法只显小细菌的形态和大小,对细菌鉴别价值较小。在染色过程中常加入媒染剂如碘、石炭酸、明矾或者加热的方法,以增加染料对细菌的亲和力。复染色法是用两种以上染料染色的方法,此法除显示细菌形态大小外,不同类型的细菌可以染上不同的颜色,从而具合鉴别细菌种类的价值,因此也称鉴别染色法。用复染色法染色时,所用的脱色剂如酒精、丙酮或酸类,用于检查染料和细菌结合的牢固程度,最后用与初染色剂颜色有鲜明对比的染料进行复染,以便进行观察,区别细菌种类。常用的复染色法有革兰氏染色法和抗酸染色。检查细菌的特殊结构,如鞭毛、英膜、异染颗粒等对鉴别细菌很有帮助。细菌特殊结构染色法不仅能使特殊的结构着色,还可使特殊结构染成与菌体不同的颜色,有利于观察。在细菌检查工