【图文】紫露草微核试验.doc

处理、恢复培养、固定及保存将过滤后的各采样点水样盛入500ml烧瓶中并编号。烧杯上蒙以带孔的塑料薄膜或盖上带孔的薄塑料板,每个处理组和对照组各插入15个花枝,对照组用自来水,在人工光照下连续处理6h。每种水中至少应设两个平行处理组,对于非水溶性物质,可先用二甲基亚砜溶解,经自来水稀释后在进行处理,同时要做二甲基亚砜的对照试验。处理到指定时间,将水样倒掉,换上自来水,在人工光照下做连续24-30h的恢复培养,除掉叶子和花梗,把花序放入新配制的卡诺氏液中固定24h,再将花序移入70%酒精中,即可制片观察。也可将固定后的花序置于3-5oC长期保存,但每月需更换70%酒精一次压片及微核观察一个花序愈是上部的花蕾年龄越老。选择一个适龄的花蕾(一般在中下部),用解剖刀把花蕾从中间劈成两部分,用解剖针或尖镊子打开花蕾,剥出花药,滴一滴醋酸洋红,并稍加压挤,置100倍显微镜下观察,若绝大部分是早期四倍体,则充分捣碎花药,让更多四倍体释放出来,并加一滴醋酸洋红(经显微镜观察染色颜色过深可滴加1-2滴45%的冰醋酸),弃去载玻片上无关杂质,小心盖上盖玻片,置酒精灯火上来回3-4次微热(不要让染液煮沸冒泡),然后趁热把玻片放在几层吸水纸下,用大拇指压挤盖玻片,取出后置250倍显微镜下观察计数,随机统计四分体和微核数,每个处理组和对照组至少观察五张叶子,统计1500个四分体。制片关键及微核统计标准严格选择早期四分体时期的花蕾压片是实验成功的关键。早期四分体直径为18-22μm,外面具有一层包膜,细胞核大而明显,一个花序只采用一个含早期四分体的适龄花蕾供制片用即可。一个四分体的微核数从零到几个不等,-3μm,呈圆形或椭圆形,分布在主核周围,着色与主核一致。以下情况的微核不应统计(1)四分体以外的微核;(2由于分裂期延缓所造成的特别大的四分体中的微核;(3)已死亡的四分体中的微核;(4)雄蕊毛、花药壁以及花丝细胞中的微核结果评价1微核率=微核总数/四分体总数2对照组和处理组微核率标准差的计算3由于对照组有本底微核,利用“平均值差的标准误差公式,可以判断处理组和对照组间微核率差异的显著程度P285公式4当平均值差等于或大于Sd表示处理组的平均值与对照组平均值差异显著,据此,可对水质是否受到诱变剂污染及污染水平进行科学的评价