丛枝菌根侵染率研究.doc

(最好是取自15cm表层植物根系附近的土壤),放在容器内用水浸泡20-30min,使土壤松散。如果土壤粘性很大,也可加入各种土壤分散剂。-,依次重叠起来。最底层用一物体垫着(如培养皿、木块等物),使筛面稍微倾斜。,停置几秒钟后,使大的石砾和杂物沉淀下去,即将悬浮的土壤溶液慢慢地倒在最上一层孔径最大的土壤筛上。倾倒时,最好集中倒在筛面的一个点上,不要使整个筛面都沾有土壤溶液。,以免在上层粗筛面的剩留物中夹藏有VA菌根真菌孢子。,再将滤液通过细筛并用水冲洗。在冲下来的筛出物中,除有许多细的沙砾和杂质外,就含有VA菌根真菌的不同直径的孢子。。,置入大烧杯中加500ml水,搅拌,静置10s。、400目分样筛,将400目筛子上的残余物用药匙转入50ml离心管中,后用清水冲洗筛子,将残余物全部转入离心管中,配平,3000转/min离心10min。(注分样筛最好直径为12cm左右,便于下面放置烧杯过筛),在离心管中加入预先配制好的质量分数为50%的蔗糖溶液,玻璃棒搅匀,配平,3000转/min离心10min(注意离心前离心管壁上不能有残余物)。,离心后的蔗糖溶液过筛子的下侧,用水将筛子上的残留物轻轻洗入划线培养皿中。(注意水不能加太多以防影响检测,培养皿划线便于统计)。,计算出菌剂中的孢子含量。注:溶于蔗糖溶液中的孢子仍可进行接种。,NicolsonTH,,46:235-,:科学出版社:190-194检测菌根侵染率的方法(曲利苯蓝染色改良法)PhillipsJM,HaymanDS,-,55:158~161挑根—碱液软化—酸化—染色—脱色—制片、。%KOH在90℃的水浴锅中染色45~60min(去除细胞质,便于染色。,老根需要时间长约1h,以根系相对透明为标准)。,用清水洗3~5次(晾至室温后再冲洗),加入2%盐酸室温下酸化5min。%曲利苯蓝于90℃水浴锅