丛枝菌根研究方法.doc

(湿筛倾注蔗糖离心法),NicolsonTH,,46:235-,:科学出版社:190-,置入大烧杯中加500ml水,搅拌,静置10s。、400目分样筛,将400目筛子上的残余物用药匙转入50ml离心管中,后用清水冲洗筛子,将残余物全部转入离心管中,配平,3000转/min离心10min。(注分样筛最好直径为12cm左右,便于下面放置烧杯过筛),在离心管中加入预先配制好的质量分数为50%的蔗糖溶液,玻璃棒搅匀,配平,3000转/min离心10min(注意离心前离心管壁上不能有残余物)。,离心后的蔗糖溶液过筛子的下侧,用水将筛子上的残留物轻轻洗入划线培养皿中。(注意水不能加太多以防影响检测,培养皿划线便于统计)。5. 解剖镜镜检统计培养皿中的孢子数目,计算出菌剂中的孢子含量。注:溶于蔗糖溶液中的孢子仍可进行接种。(曲利苯蓝染色法)PhillipsJM,HaymanDS,-,55:158~,用FAA固定液(70%酒精:甲醛:冰醋酸=90:5:5)固定24h。%KOH在100℃的恒温干燥箱内反应45min(去除细胞质,便于染色。一般来说,幼根需要时间较短,,老根需要时间长,大约1h,以根系相对透明为标准)。,加入10%H2O2漂白15min,用蒸馏水清洗,·L-1盐酸酸化1h以上(可以延长,曲利苯蓝为酸性染料,需酸化,酸化时间应不少于30min)。(Trypanblue)乳酸酚溶液(乳酸100mL,甘油100mL,苯酚100mL,蒸馏水100mL,)染色5min。(乳酸100ml,甘油100mL,苯酚100mL,蒸馏水100mL)脱色15min。,镜检。,苯酚有毒,进行染色、脱色步骤时需在通风橱中进行,实验人员需戴口罩。说明:常规制片用水即可,用封固剂(,甘油1ml,乳酸20ml,蒸馏水10ml)制片片子可以保存较长时间,但容易产生气泡,另聚乙烯醇有毒需小心。经脱色后的植物根系可以在甘油中保存数月。,KoughJL&Gianinazzi-PearsonV(1986)Mesuredutauxdemyco