病毒血凝及血凝抑制试验.doc

病毒的血凝及血凝抑制试验有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力,称为病毒的血凝,利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验,以此来推测被检材料中有无病毒存在,是非特异性的,但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制,即血球凝集抑制(HI)试验,具有特异性。通过HA-HI试验,可用已知血清来鉴定未知病毒,也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。[目的要求]掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法,了解其实用价值。[材料与试剂]“U”形或“V”形微量反应板,50?L定量移液器,滴头,微型振荡器。,%鸡红细胞悬液。(尿囊液或冻干疫苗液),新城疫阳性血清,被检鸡血清。[实验内容及操作方法](一)血球凝集(HA),自左至右各孔加50?L生理盐水。?L病毒液(尿囊液或冻干疫苗液),混合均匀后,吸50?L至第2孔,依次倍比稀释至第11孔,吸弃50?L;第12孔为红细胞对照。%鸡红细胞悬液50?L,在振荡器上振荡,室温下静置后观察结果(表4-1)。表4-1病毒血凝试验的操作方法(单位:?L)孔号123456789101112病毒稀释度1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:10241:%红细胞505050505050505050505050弃50结果观察+++++++++++++++++++++++++++++++++--:从静置后10min开始观察结果,待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集,沉于孔底,平铺呈网状,即为100%凝集(++++),不凝集者(-)红细胞沉于孔底呈点状。以100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价,即为一个凝集单位。从表4-1看出,该新城疫病毒液的血凝价为1:128,则l:128为1个血凝单位,1:64、l:32分别为2、4个血凝单位,或将128/4=32,即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。(二)血球凝集抑制(HI),确定病毒的血凝价,配制出4个血凝单位的病毒液。,用固定病毒稀释血清的方法,自第1孔至第11孔各加50?L生理盐水。?L,吹吸混合均匀,吸50?L至第2孔,依此倍比稀释至第10孔,吸弃50?L,稀释度分别为:1:2、1:4、1:8……;第12孔加新城疫阳性血清50?L,作为血清对照。?L4个血凝单位的新城疫病毒液,其中第11孔为4单位新城疫病毒液对照,振荡混合均匀,置室温中作用10min。%鸡红细胞悬液50?L,振荡混合均匀,室温下静置后观察结果(表4-2)。表4-2病毒血凝抑制试验的操作方法(单位:?L)孔号123456789101112血清稀释度1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:1024病毒对照血清对照生理盐水5050505050505050505050被检鸡血清5050505050505050505