常用作物生理指标测定方法.doc

SOD,POD,CAT,MDA,可溶性蛋白用同一提取液。磷酸缓冲液配制:A液():=(=)定容1000MLB液():=(=)定容到1000ml浓度mol//l甲硫氨酸(Met)溶液:(NBT)溶液:-Na2溶液:-::磷酸:Met:NBT:EDTA-Na2:FD=5:30:6:6:6:+磷酸(,PH=)+++EDTA=+:,加1ml磷酸缓冲液(=),冰浴研磨,研磨后再加入1ml缓冲液倒入离心管定容,平衡后低温(0-4℃)10000rpm离心后10min冷藏保存。取相同型号的试管,加入50μl上清液(2支对照管加缓冲液),分别加3ml反应液(),其中一支对照放于暗处,其余在4000lux下反应20-30min(温度高时时间短,温度低时时间长)后再560nm下进行比色。计算公式:SOD总活性(-1FW)=(Ack-A)*V/Ack**W*a(V酶液总体积2ml,w样品重=,a测定是的酶液体积=)POD:取上清液20μl加入比色杯中(对照加磷酸),加3ml反应液,马上读470nm下的OD值并计时,每个1min读1次(读0,1,2,3min)的OD值。反应液:,PH=,加入愈创木酚28μl,于磁力搅拌器加热溶解,加入30%的H2O219μl存于冰箱内。计算公式:POD总活性(△OD470/)=△OD470*V/a*W(V=4ml,a=,W=)CAT:取上清液100μl加入比色杯中(对照加磷酸),加3ml反应液,马上读240nm下的OD值并计时,每个1min再读一次(读第0,1min的OD值)。反应液:=,(%H2O2定容至1000ml)5ml。计算公式:CAT总活性(△OD240/)=△OD240*V/a*W(V=4ml,a=,W=)数值下降。MDA:取上清液1ml(对照加1ml水),加2mlTBA(硫代巴比妥酸),封口沸水浴15min,迅速冷却(用冷水冲泡),倒入指形管中,4000转下离心20min,取上清液于600nm,532nm,450nm下比色。%TBA:,再用10%三氯乙酸定容100ml。MDA(μg/gFW)=C*V/W=(D532-D600)+(V=,W=)可溶性蛋白:取上清液20μl(对照加水),加3ml考马斯亮蓝放置2min,立即于595nm比色。G-250:称取100mgG-250溶于50ml90%乙醇中,加入85%(v/v)磷酸100ml,定容至1000ml,常温可保存一个月。计算公式:蛋白质含量(mg/gFW)=3*Y*V/5*1000*a*W标准曲线Y=+(生理组)或Y=+(园艺系)V酶液总体积=4ml,a=,W=,3/5由于标线是5ml中的含量,而本方法用3ml,1000将μg变为mg)可滴定酸:,称重,放入高速组织捣碎机内,加入等量水,捣碎1~2min。每2g匀浆折算为1g试样。-50g,用无CO2水100ml,洗入250ml容量瓶,在80度水浴中30min,取出冷却,用无CO2水定容过滤。。加酚酞5-10d,用NaOH标液滴定,呈微红色,当滴定接近终点时,若溶液仍呈橙黄色,可再加2d酚酞,CK空白滴定。记下所消耗的体积。结果计算(1)试样的可滴定酸度以